系統注意事項

系統注意事項

要決定一台儀器能否用於純化,須考慮它的物理參數。在準備純化系統時,需要注意自動化、幫浦、偵測器流體槽、進樣器、管路、管柱和餾分收集器等設備。模組系統能發揮充分的靈活性,因應高通量需求增加的情形。

自動化程度通常取決於使用者的工作流程和預算。一般來說,新創公司和大學實驗室需要的通量低,傾向人工或半自動化系統,而大型製藥或製造公司則常會使用高通量、自動化的系統。

圖22.低壓混合系統,例如Waters 2545四元梯度模組,搭配2489紫外線/可見光偵測器和餾分收集器,適合低通量需求。
圖23.Waters自動純化系統搭配ACQUITY QDa質量偵測器,可透過質量偵測達到高通量的餾分收集。

軟體和系統控制

需要一台小型電腦,以便在等度和梯度模式下,控制二元、三元和四元系統中的幫浦流速和溶劑組成。電腦軟體也會記錄偵測器和餾分收集器的輸出內容。根據軟體套件的複雜程度,還可用於執行方法開發模擬和處理數據。

幫浦

溶劑輸送系統或幫浦是層析分離的核心。無論溶劑的可壓縮性如何,用於層析分離的幫浦都必須提供無脈衝、精準無誤和可再現的流速。可根據目標流速選擇純化幫浦,例如0.5 mL/min用於小規模純化,150 mL/min或以上用於大規模純化。幫浦可以在高壓(二元)或低壓(四元)條件下混合溶劑。

二元梯度模組可以在混合槽中混合兩種不同的溶劑。混合槽後面有一個阻尼器、一個第二混合器和一個清除閥。混合溶劑的組成取決於兩個溶劑通道輸送的不同流量。高壓混合幫浦對移動相中溶解的氣體不太靈敏,一般不需要對溶劑進行脫氣。

所以幫浦的系統體積可以大大縮減,在分析和製備規模上提供精確等效的效能。

圖24.Waters二元梯度模組(BGM)是一種高壓混合二元梯度幫浦,兼具分析級和製備級流速。

四元幫浦可提供多達4種不同溶劑的梯度,還能使用短時間打開的閥門。閥門的用途是在低壓下以正確的比例混合少量不同的溶劑。使用這種幫浦策略,溶解的氣體會分離而形成氣泡,讓後續流路的壓縮、注入、分離和偵測出現問題。因此,移動相必須除氣。可以使用線上除氣機、氦氣噴灑或手動真空除氣的方式來處理。這些幫浦可在其指定的流速範圍內提供非常精準無誤的溶劑比例。

圖25.Waters四元梯度模組(QGM)是一種低壓混合四元梯度幫浦,能在其指定的流速範圍內達到製備級流速。

上樣

管柱內徑

流體處理裝置

最大流速

µg–mg

3.9–7.8 mm

1525二元HPLC幫浦*

10 mL/min

µg–10s mg

3.9-19 mm

1525二元HPLC幫浦*和EF套組

22.5 mL/min

mg–10s mg

3.9-50 mm

2535四元梯度模組

50 mL/min

m–g

4.6-50 mm

2545二元梯度模組*

150 mL/min

m–g

4.6-50 mm

2545四元梯度模組

150 mL/min

mg–10s g

7.8-75 mm

2555四元梯度模組

300 mL/min

圖26.Waters溶劑輸送系統。*高壓混合。

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