아미노산 가수분해와 분석 종합 가이드

Eldex(Eldex Laboratories, Inc. 30 Executive Court Napa, CA 94558-6278 USA) 가수분해/유도체화 워크스테이션(H/D WorkStation – 구 Pico-Tag 워크스테이션)은 아미노산 분석에 앞서 샘플을 안정적이고 일관성 있게 가수분해하고 프리 컬럼 유도체화를 수행하는 독립형 장치입니다. 이 워크스테이션은 단백질 또는 펩타이드를 증기상에서 가수분해하는 데 필요한 기능을 모두 다 갖추고 있습니다.

본 섹션에서는 이 워크스테이션을 설치하고 운용하는 방법을 간략히 설명합니다. 자세한 사항은 Eldex 워크스테이션 사용설명서를 참고하십시오.

이 장치는 진공과 질소 연결이 필요합니다.

드와 플라스크와 콜드 핑거가 워크스테이션과 함께 제공됩니다. 드와(Dewar)에는 드라이아이스가 필요합니다.

장치의 반응 바이알 어셈블리는 샘플 튜브를 최대 12개까지 동시에 수용 가능합니다.

• 부피 기준 1% 페놀이 들어 있는 6N HCl
• 질소(사전 정제 등급)
• 메탄올
• 드라이아이스

1. 6N Hcl 등의 산으로 샘플 튜브를 세척합니다. 물로 깨끗이 헹군 후 100% (무변성) 에탄올로 다시 헹굽니다. 그리고 진공 상태에서 건조시킵니다. 반응 바아일에 넣기 전에 다이아몬드 펜으로 샘플 튜브에 식별 표시를 할 수 있습니다.
2. 실린지나 마이크로피펫으로 샘플 0.5~10µg이 담긴 용액을 샘플 튜브에 넣습니다. 반응 바이알 하나에 샘플 튜브를 12개까지 넣을 수 있습니다. 샘플 튜브는 피부에 닿지 않도록 테플론 핀셋이나 고무장갑으로 다뤄야 합니다.
3. 오븐이 평형 상태를 이루도록 105°C에 20~30분 정도 두었다가 가수분해를 합니다.

1. 드와 플라스크 내 콜드 핑거 주위로 드라이아이스를 놓습니다. 콜드 트랩에 메탄올이나 2-프로판올을 조심스럽게 추가합니다.
2. 진공 펌프를 켭니다.
3. 반응 바이알 마개를 바이알에 끼웁니다. 마개에 있는 버튼을 밀어 (녹색 위치로) 엽니다.
4. 바이알 상부가 진공 포트에 오도록 놓고 바이알 바닥을 검은 “shoe” 위에서 워크스테이션 쪽으로 밀어 반응 바이알을 워크스테이션에 설치합니다.
5. 진공 밸브를 엽니다.
6. 진공 게이지가 65 밀리토르(millitorr)에 도달하면 샘플이 제대로 증발된 것입니다.
7. 시스템을 이 값으로 몇 분 더 유지해 추가 건조시킵니다.
8. 진공 밸브를 닫고 워크스테이션에서 반응 바이알을 꺼냅니다. 바이알의 마개를 엽니다.
9. 바이알 바닥에 HCl/페놀을 200µL 추가합니다. 이때 HCl이 튜브에 직접 들어가지 않도록 주의합니다.
10. 반응 바이알 마개를 열림(녹색) 위치에 두고 마개를 바이알에 끼운 다음 바이알을 워크스테이션에 설치합니다.

1. 질소 밸브가 닫혔는지 확인한 후 진공 밸브를 조심스럽게 열어 진공 게이지를 1–2 Torr에 맞추면 HCl에 기포가 생기기 시작합니다. 이 과정은 20~30초 정도 지속됩니다.
2. 진공 밸브를 닫습니다.
3. 질소 밸브를 열고 5초 동안 퍼지합니다. 질소 밸브를 닫습니다.
4. 진공-질소 사이클을 3회 실시합니다. 마지막 사이클이 끝나면 진공 밸브를 열어 둡니다.
5. 산이 모두 다 증발하면 안 됩니다. 진공 게이지가 500 밀리토르(millitorr) 아래로 떨어지면 퍼지를 중단합니다.

1. 바이알이 진공 상태에 있을 때 바이알 마개 밸브를 (빨간색이 보이게) 닫습니다.
2. 진공 밸브를 닫고 워크스테이션에서 바이알을 꺼냅니다.
3. 반응 바이알을 오븐에 넣습니다. 장갑이나 핀셋을 이용해 오븐 내부에 닿지 않게 합니다.
4. 이제 워크스테이션의 진공과 질소 시스템을 꺼도 됩니다.

1. 20~24시간이 지나면 오븐에서 바이알을 꺼내 식힙니다. 바이알 마개 밸브를 (녹색이 보이도록) 엽니다. 반응 바이알 마개를 열고 테플론 코팅이 된 핀셋으로 샘플 튜브를 조심스럽게 꺼냅니다. 실험실 거즈로 각 튜브 외부의 HCl을 닦아냅니다.
2. 샘플 튜브를 새 반응 바이알로 옮깁니다.
3. 반응 바이알 마개를 바이알에 끼웁니다.
4. 바이알 마개 밸브를 (녹색이 보이도록) 엽니다. 반응 바이알을 워크스테이션에 설치하고 진공 밸브를 조심스럽게 엽니다.
5. 진공 게이지가 65 밀리토르(millitorr)에 도달하면 샘플이 제대로 증발된 것입니다.
6. 시스템을 이 값으로 몇 분 더 유지해 추가 건조시킵니다.