Guia abrangente para hidrólise e análise de aminoácidos

A Workstation Eldex (Eldex Laboratories, Inc. 30 Executive Court Napa, CA 94558-6278 EUA) de hidrólise/derivatização (Workstation de H/D – anteriormente a Workstation Pico-Tag) é uma unidade autônoma que fornece processos consistentes e confiáveis de hidrólise e derivatização pré-coluna de amostras submetidas à análise de aminoácidos. A Workstation fornece todas as funções para hidrólise de peptídeos ou proteínas em fase de vapor.

Esta seção descreve brevemente a configuração e a operação da workstation. Para obter mais informações, consulte o manual da Workstation Eldex.

A unidade requer conexões de vácuo e nitrogênio.

Um frasco de Dewar e um dedo frio são fornecidos como parte da workstation. O Dewar requer gelo seco.

As unidades de vial de reação da unidade podem acomodar até 12 tubos de amostra simultaneamente.

• HCl 6 N com 1% de fenol por volume
• Nitrogênio (grau pré-purificado)
• Metanol
• Gelo seco

1. Limpe os tubos de amostra com um ácido, como HCl 6 N. Lave-os cuidadosamente com água e depois com etanol 100% (não desnaturado). Seque-os sob vácuo. Para fins de identificação, os tubos de amostra podem ser riscados com um lápis de diamante antes de serem colocados no vial de reação.
2. Utilize uma seringa ou micropipeta para colocar uma solução contendo 0,5–10 µg da amostra nos tubos de amostra. Até 12 tubos de amostra podem ser colocados em um vial de reação única. Os tubos de amostra devem ser manuseados com uma pinça de Teflon ou com luvas de plástico para evitar a contaminação por contato com a pele.
3. Para permitir que o forno se equilibre, ajuste-o para 105 °C por 20 a 30 minutos antes de realizar a hidrólise.

1. Coloque gelo seco no frasco de Dewar ao redor do dedo frio. Adicione cuidadosamente metanol ou 2-propanol à retenção fria.
2. Ligue a bomba de vácuo.
3. Enrosque a tampa do vial de reação no vial. Deslize o botão na tampa até a posição aberta (entrada verde).
4. Instale o vial de reação na Workstation posicionando a parte superior do vial na porta de vácuo e deslizando a parte inferior do vial em direção à Workstation na “sapata” preta.
5. Abra a válvula de vácuo.
6. Quando o medidor de vácuo atingir cerca de 65 militorr, as amostras serão devidamente evaporadas.
7. Para secagem adicional, permita que o sistema permaneça nessa leitura por vários minutos.
8. Feche a válvula de vácuo e remova o vial de reação da Workstation. Desenrosque a tampa do vial.
9. Adicione 200 µL de HCl/fenol ao fundo do vial. Tome cuidado para não introduzir o HCl diretamente em nenhum dos tubos.
10. Com a tampa do vial de reação na posição aberta (entrada verde), enrosque a tampa no vial e instale-o na Workstation.

1. Verifique se a válvula de nitrogênio está fechada e abra cuidadosamente a válvula de vácuo até que o medidor de vácuo leia cerca de 1–2 Torr e o HCl comece a borbulhar. O procedimento leva cerca de 20 a 30 segundos.
2. Feche a válvula de vácuo.
3. Abra a válvula de nitrogênio e purgue por cinco segundos. Feche a válvula de nitrogênio.
4. Repita o ciclo de nitrogênio a vácuo três vezes. Deixe a válvula de vácuo aberta após o ciclo final.
5. Não evapore o ácido até secar. Se o medidor de vácuo cair abaixo de 500 militorr, interrompa a purga.

1. Enquanto o vial estiver sob vácuo, feche a válvula da tampa do vácuo (entrada vermelha).
2. Feche a válvula de vácuo e remova o vial da Workstation.
3. Coloque o vial de reação no forno. Use luvas ou pinças para evitar o contato com o interior do forno.
4. Agora é possível desligar os sistemas de vácuo e nitrogênio da Workstation.

1. Após 20–24 horas, remova o vial do forno para esfriar. Abra a válvula da tampa do vial (entrada verde). Remova a tampa do vial de reação e retire cuidadosamente os tubos de amostra com uma pinça revestida de Teflon. Use lenços de laboratório para remover o HCl da parte externa de cada tubo.
2. Transfira os tubos de amostra para um vial de reação novo.
3. Enrosque uma tampa de vial de reação no vial.
4. Abra a válvula da tampa do vial (entrada verde). Instale o vial de reação na Workstation e abra cuidadosamente a válvula de vácuo.
5. Quando o medidor de vácuo atingir cerca de 65 militorr, as amostras serão devidamente evaporadas.
6. Para secagem adicional, permita que o sistema permaneça nessa leitura por vários minutos.