胺基酸水解與分析綜合指南

Eldex (Eldex Laboratories, Inc. 30 Executive Court Napa, CA 94558-6278 USA)水解/衍生化工作站（H/D工作站 – 以前的Pico-Tag工作站）是一套獨立的裝置，為執行胺基酸分析的樣品提供可靠且一致的水解與管柱前衍生化。工作站提供蛋白質或胜肽汽相水解所需的所有功能。

本節簡要概述工作站的設置與操作。如需詳細資訊，請查詢Eldex工作站手冊。

該裝置需要連接真空與氮氣。

工作站內提供Dewar燒瓶與冷凝管。Dewar需要乾冰。

該裝置的反應瓶組件可以同時容納多達12支樣品試管。

• 6 N HCl，含1%苯酚（按體積計算）
• 氮氣（預純化級）
• 甲醇
• 乾冰

1. 用酸清潔樣品試管，例如6 N HCl。用水徹底沖洗，然後再以100%（未變性）乙醇沖洗。在真空狀態下乾燥。為方便識別，將樣品試管用尖頭鉛筆劃線後再放入反應瓶。
2. 使用注射筒或微量移液管將含有0.5–10 µg樣品的溶液注入樣品試管內。一個反應瓶可以放入多達12支樣品試管。應用鐵氟龍鉗子或戴上塑膠手套拿取樣品試管，避免皮膚接觸造成污染。
3. 為平衡烘箱，在執行水解之前先在105 °C之下靜置20–30分鐘。

1. 將乾冰放入冷凝管週圍的Dewar燒瓶中。向冷阱中小心放入甲醇或異丙醇。
2. 打開真空幫浦。
3. 旋緊反應瓶的瓶蓋。將瓶蓋上的按鈕滑到開啟（綠色）位置。
4. 將反應瓶安裝到工作站上，反應瓶頂部置於真空端口，反應瓶底部滑入工作站的黑色「底板」。
5. 打開真空閥。
6. 真空計讀數達到65毫托後，樣品適當蒸發。
7. 讓系統在此讀數下保持幾分鐘就能讓樣品更乾燥。
8. 關閉真空閥並將反應瓶移出工作站。旋鬆瓶蓋。
9. 向瓶底加入200 µL的HCl/苯酚。注意不要將HCl直接放入任何試管內。
10. 將反應瓶的瓶蓋設於開啟（綠色）位置，旋緊瓶蓋，將反應瓶安裝到工作站。

1. 確認氮氣閥關閉並小心地打開真空閥，直到真空計讀數達到1-2托，且HCl開始冒泡。此程序大約需要20–30秒。
2. 關閉真空閥。
3. 打開氮氣閥並吹掃五秒。關閉氮氣閥。
4. 重複真空氮氣循環三次。最後一次循環後維持真空閥打開。
5. 不要蒸乾酸液。如果真空計讀數降至500毫托以下，停止吹掃。

1. 在真空狀態下關閉反應瓶的蓋閥（紅色）。
2. 關閉真空閥並將反應瓶移出工作站。
3. 將反應瓶置於烘箱中。使用手套或鉗子，避免接觸烘箱內部。
4. 現在可以關閉工作站的真空與氮氣系統。

1. 20–24小時後，將反應瓶自烘箱中取出放涼。打開反應瓶的蓋閥（綠色）。取下反應瓶的瓶蓋，並以鐵氟龍塗裝的鉗子小心取出樣品試管。使用實驗室抹布擦掉每支試管外側的HCI。
2. 將樣品試管轉移到新的反應瓶內。
3. 旋緊反應瓶的瓶蓋。
4. 打開反應瓶的蓋閥（綠色）。將反應瓶安裝到工作站上並小心地打開真空閥。
5. 真空計讀數達到65毫托後，樣品適當蒸發。
6. 讓系統在此讀數下保持幾分鐘就能讓樣品更乾燥。