氨基酸水解和分析综合指南

Eldex (Eldex Laboratories, Inc. 30 Executive Court Napa, CA 94558-6278 USA)水解/衍生化工作站（H/D工作站 - 原Pico-Tag工作站）是一种独立的装置，能够为接受氨基酸分析的样品提供可靠且一致的水解和柱前衍生化。该工作站提供的所有功能均适用于气相蛋白质或肽水解。

本节简要概述了工作站的设置和操作。如需了解更多信息，请参阅Eldex工作站手册。

该装置需要真空和氮气连接。

杜瓦瓶和冷指作为该工作站的一部分提供。杜瓦瓶需要使用干冰。

该装置的反应瓶组件可同时容纳多达12个样品管。

• 含1%（体积比）苯酚的6 N盐酸
• 氮气（预纯化级）
• 甲醇
• 干冰

1. 用酸（例如6 N盐酸）清洁样品管。依次用水和100%（未变性）乙醇彻底冲洗。在真空下将其干燥。出于标识目的，在将样品管放入反应瓶之前，可以用金刚石笔在管上划线。
2. 使用注射器或微量移液管将含有0.5–10 µg样品的溶液移入样品管中。可以将多达12个样品管放入单个反应瓶中。应使用Teflon钳或塑料手套处理样品管，以免皮肤接触引起污染。
3. 为使恒温箱达到平衡，在水解前将恒温箱设置为105 °C并保持20–30 min。

1. 将干冰置于杜瓦瓶中的冷指周围。将甲醇或异丙醇小心地加入冷阱中。
2. 打开真空泵。
3. 将瓶盖拧到反应瓶上。将瓶盖上的按钮滑动至打开（绿色）位置。
4. 将反应瓶顶部置于真空端口中，然后将反应瓶底部在黑色“靴”上滑入工作站，反应瓶即安装到工作站上。
5. 打开真空阀。
6. 真空计达到约65 mTorr 时，样品得到适当蒸发。
7. 为进一步干燥，将系统在该读数下保持几分钟。
8. 关闭真空阀，并从工作站中取出反应瓶。从反应瓶上拧下瓶盖。
9. 将200 μL盐酸/苯酚加入反应瓶底部。注意不要将盐酸直接引入任何管中。
10. 在反应瓶盖处于打开（绿色）位置时，将瓶盖拧到反应瓶上，然后将反应瓶安装到工作站上。

1. 确认氮气阀已关闭并小心地打开真空阀，直至真空计读数达到约1–2 Torr并且盐酸开始冒泡。该过程需要约20–30 s。
2. 关闭真空阀。
3. 打开氮气阀并吹扫5 s。关闭氮气阀。
4. 重复真空氮气循环3次。在最后一次循环后，保持真空阀打开。
5. 请勿将酸蒸干。如果真空计读数低于500 mTorr，则停止吹扫。

1. 当反应瓶处于真空状态时，关闭瓶盖阀（红色）。
2. 关闭真空阀，并从工作站中取出反应瓶。
3. 将反应瓶放入恒温箱。使用手套或夹钳，以免接触恒温箱内部。
4. 现在可以关闭工作站的真空和氮气系统。

1. 20–24 h后，将反应瓶从恒温箱中取出以进行冷却。打开瓶盖阀（绿色）。取下反应瓶盖，用带有Teflon涂层的夹钳小心地取出样品管。使用实验室抹布擦去每个样品管外的盐酸。
2. 将样品管转移到新的反应瓶中。
3. 将瓶盖拧到反应瓶上。
4. 打开瓶盖阀（绿色）。将反应瓶安装到工作站上并小心打开真空阀。
5. 真空计达到约65 mTorr 时，样品得到适当蒸发。
6. 为进一步干燥，将系统在该读数下保持几分钟。