氨基酸水解和分析综合指南

在食品、饲料和生物治疗产品的研究、开发与商业化中准确分离、鉴定和定量分析氨基酸的任务具有挑战性。这些应用的共同点在于需要充分的样品水解，这是分析结合氨基酸（例如肽和蛋白质）的工作流程中重要的第一步。通过水解可以分析游离氨基酸，使用离子交换或反相色谱法将这些氨基酸分离。

鉴于样品制备工作流程中存在挑战，本文档旨在为样品水解提供有用的指南。本文档中包含的材料仅作为此水解过程的入门指引。根据样品类型及其复杂性不同，可能需要对所述水解方法进行修改。如需有关水解或特定程序的更多信息或故障排除提示，您应当联系水解仪器的制造商或相应的机构 - 美国分析化学家协会(AOAC)。沃特世无法提供有关特定样品类型的指导。

为通过HPLC或UPLC分析水解后的样品（游离氨基酸），沃特世提供了许多使用柱前衍生化的解决方案，以便可以通过光学检测来分析氨基酸。由于这是工作流程的一部分，因此我们将简要介绍沃特世HPLC (AccQ•Tag)方法和UPLC氨基酸分析(AccQ•Tag Ultra)解决方案。本文档不包含有关Waters Pico-Tag（异硫氰酸苯酯柱前衍生化试剂）氨基酸分析方法的信息。尽管Pico-Tag方法仍然可用，但基于AccQ•Tag的方法具有显著性能优势，建议将后者用于新应用。

注：本文档重点讲述纯化后的蛋白质/肽、食品和饲料的水解以及氨基酸分析。其并非专门针对尿液、血浆、全肠外营养产品或细胞培养基样品中的氨基酸分析。有关这些应用的信息，请访问www.waters.com/AAA和www.waters.com/Kairos。

通用分析指南和建议

鉴于氨基酸在环境中无处不在，背景污染很容易导致在所需的样品分析中出现20 pmol或更多的某些氨基酸，特别是丝氨酸(Ser)和甘氨酸(Gly)。可采取特殊预防措施来减少背景氨基酸的量。或者，如果水解足够的样品以提供每种氨基酸至少200 pmol的量，则可以将背景污染的影响程度限制在10%以下。无论采用何种方式，为了利用现代衍生化技术和色谱系统的灵敏度（检测限可达1 pmol或更低），洁净度和良好的实验室技术都至关重要。污染源无处不在；常见的污染源包括脏污的玻璃器皿、实验室动物、空气中的灰尘、指纹和滑石粉。

尽管没有一套完美的系统可以改善低含量氨基酸分析的整体质量，但以下考虑要点和实践将会有所帮助：

• 在500 °C下过夜热解所有6 × 50 mm水解管（P/N：WAT007571），以提供尽可能洁净的玻璃。从冷却的炉中取出水解管后，用铝箔（经丙酮清洁）将其覆盖并储存于有遮盖的区域内。
• 请注意，移液器、一次性吸头、注射器和该程序中使用的其他附件都可能引入污染物。
• 在水解之前，使用干净的无粉手套和干净的夹钳来执行所有处理步骤。外科口罩可能适用。
• 始终使用新鲜试剂。每种试剂都可能成为污染源。最佳做法是将刚打开的试剂分装到更小、更干净的容器中。
• 每周使用对照空白衍生化检查试剂质量。
• 尽可能使用气相水解程序。纯度不足的盐酸可能是水解不可靠的根源。我们一致认为使用恒沸盐酸十分合适。高纯度、试剂级浓盐酸可能不够洁净，而且其包含的氯含量明显高于恒沸级。
• 造成任何背景污染的测试用水和缓冲液成分用作对照样品。例如，实验室用的双蒸水通常会产生不可接受的氨基酸水平。为获得高水质，强烈建议使用纯化系统（18.2mΩ-cm水）。
• 合适的水解对照空白是与样品经过完全相同的处理的样品管。其中包括水解步骤。