Guía completa sobre la hidrólisis y el análisis de aminoácidos

La estación de trabajo de hidrólisis/derivatización Eldex (Eldex Laboratories, Inc. 30 Executive Court Napa, CA 94558-6278 EE.UU.) (estación de trabajo H/D; anteriormente, estación de trabajo Pico-Tag) es una unidad independiente que proporciona una hidrólisis fiable y consistente y derivatización precolumna de las muestras sometidas a análisis de aminoácidos. La estación de trabajo proporciona todas las funciones para la hidrólisis de proteínas o péptidos en fase de vapor.

Esta sección describe brevemente la configuración y el funcionamiento de la estación de trabajo. Para obtener más información, consulte el manual de la estación de trabajo Eldex.

La unidad requiere conexiones de vacío y nitrógeno.

Se proporciona un matraz Dewar y un dedo frío como parte de la estación de trabajo. El Dewar requiere hielo seco.

Los conjuntos de viales de reacción de la unidad pueden alojar hasta 12 tubos de muestra simultáneamente.

• HCl 6 N con 1 % de fenol por volumen
• Nitrógeno (grado prepurificado)
• Metanol
• Hielo seco

1. Limpiar los tubos de muestra con un ácido como HCl 6 N. Enjuagarlos bien con agua y después con etanol (desnaturalizado) al 100 %. Secarlos al vacío. Para fines de identificación, los tubos de muestra se pueden marcar con un lápiz de diamante antes de colocarlos en el vial de reacción.
2. Utilizar una jeringa o una micropipeta para colocar una solución que contenga de 0,5 a 10 µg de muestra en los tubos de muestra. Se pueden colocar hasta 12 tubos de muestra en un solo vial de reacción. Los tubos de muestra deben manipularse con pinzas de teflón o con guantes de plástico para evitar la contaminación por contacto con la piel.
3. Para permitir que el horno se equilibre, establecer una temperatura de 105 °C durante 20 a 30 minutos antes de realizar la hidrólisis.

1. Colocar hielo seco en el matraz Dewar alrededor del dedo frío. Añadir metanol o 2-propanol a la trampa fría de forma cuidadosa.
2. Encender la bomba vacío.
3. Enroscar la tapa del vial de reacción en el vial. Deslizar el botón de la tapa a la posición de abierto (verde hacia dentro).
4. Instalar el vial de reacción en la estación de trabajo colocando la parte superior del vial en el puerto de vacío y deslizando la parte inferior del vial hacia la estación de trabajo en la “zapata” negra.
5. Abrir la válvula de vacío.
6. Una vez que el manómetro de vacío alcanza los 65 militorr, las muestras se evaporan correctamente.
7. Para el secado adicional, permitir que la lectura del sistema permanezca de esa manera durante varios minutos.
8. Cerrar la válvula de vacío y extraer el vial de reacción de la estación de trabajo. Desenroscar la tapa del vial.
9. Añadir 200 µL de HCl/fenol al fondo del vial. Proceder con cuidado para no introducir HCl directamente en ninguno de los tubos.
10. Con la tapa del vial de reacción en la posición de abierto (verde hacia adentro), enroscar la tapa en el vial e instalar el vial en la estación de trabajo.

1. Verificar que la válvula de nitrógeno esté cerrada y abrir con cuidado la válvula de vacío hasta que el manómetro de vacío marque aproximadamente 1 a 2 Torr y el HCl comience a burbujear. El procedimiento dura entre 20 y 30 segundos.
2. Cerrar la válvula de nitrógeno.
3. Abrir la válvula de nitrógeno y purgar durante cinco segundos. Cerrar la válvula de vacío.
4. Repetir el ciclo de vacío-nitrógeno tres veces. Dejar la válvula de vacío abierta después del último ciclo.
5. No evaporar el ácido a sequedad. Si el indicador de vacío desciende por debajo de 500 militorr, interrumpir el proceso de purga.

1. Mientras el vial está en vacío, cerrar la válvula de la tapa del vial (rojo hacia adentro).
2. Cerrar la válvula de vacío y extraer el vial de la estación de trabajo.
3. Colocar el vial de reacción en el horno. Utilizar guantes o pinzas para evitar el contacto con el interior del horno.
4. Ahora es posible apagar los sistemas de vacío y nitrógeno de la estación de trabajo.

1. Después de 20 a 24 horas, retirar el vial del horno para que se enfríe. Abrir la válvula de la tapa del vial (verde hacia adentro). Quitar la tapa del vial de reacción y extraer con cuidado los tubos de muestra con pinzas recubiertas con teflón. Utilizar paños de laboratorio para eliminar el HCl del exterior de cada tubo.
2. Transferir los tubos de muestra a un vial de reacción nuevo.
3. Enroscar una tapa en el vial de reacción.
4. Abrir la válvula de la tapa del vial (verde hacia adentro). Instalar el vial de reacción en la estación de trabajo y abrir con cuidado la válvula de vacío.
5. Una vez que el manómetro de vacío alcanza los 65 militorr, las muestras se evaporan correctamente.
6. Para el secado adicional, permitir que la lectura del sistema permanezca de esa manera durante varios minutos.