펩타이드 분리를 위한 실용적 접근 방식

능동 분할기

사용자가 프로그래밍한 대로 정의된 분배 비율로 분취용 유동 스트림을 샘플링하여 질량분석 검출기 신호를 관리하는 데 사용되는 장치입니다. 샘플은 희석되어 보충 용매와 함께 검출기로 전달됩니다.

At-column dilution(ACD)

샘플을 컬럼 헤드에서 강용매로 희석하여 질량 용량을 높이고, 분리능을 향상시키며, 컬럼 수명을 늘리고, LC 시스템 견고성을 향상시키는 Waters 고유의 주입 기술입니다.

평균 질량

 동위원소 조성에 대해 가중치가 적용된 이온 또는 분자 질량입니다.

Centroid

질량 스펙트럼의 각 이온 분포에 대해 하나의 중심 데이터 포인트를 표시하도록 처리된 Continuum 데이터로, 질량 스펙트럼에서 막대로 표시됩니다.

전하 상태

질량분석기는 질량대 전하 비율(m/z)에 기초하여 작동하며, 여기서 z는 전하 상태로 정의됩니다. 동위원소 간 이론적 질량 차이인 1Da를 동위원소 간 분자의 실제 질량 차이로 나누어 계산합니다.
단일 전하 m/z = (M+H)/1
이중 전하 m/z = (M+2H)/2
n 전하 m/z = (M+nH)/n
n 전하 이온의 동위원소 피크는 1/n Da로 분리됩니다(예를 들어 이중 전하를 띠는 이온의 동위원소 피크는 0.5Da로 분리됨). 다중 하전은 질량분석기의 질량 범위를 확장합니다.

발색단

특정 주파수에서 빛을 흡수하는 분자 그룹입니다.

컬럼 부피

컬럼 본체 내부의 부피입니다.

Continuum 데이터

질량 스펙트럼에 존재하는 모든 신호의 분포에 대한 전체 프로파일입니다.

절단

고체상 펩타이드 합성에서 레진으로부터 펩타이드가 제거되는 현상입니다.

지연 부피

크로마토그래피에서 그래디언트 혼합 지점에서 컬럼 헤드까지의 부피입니다.

탈보호

아미노산 곁사슬 보호기가 제거되는 현상입니다. 고체상 펩타이드 합성에서 N 말단 펩타이드 보호기의 제거일 수도 있습니다.

드웰부피(dwell volume)

시스템 부피와 동일합니다.

전기 분무

매우 적은 조각화를 생성하고 극성 화합물 및 생체 분자를 분석하는 데 유용한 대기압 이온화 기법입니다.

포커싱 그래디언트

샘플 로딩에 사용되는 낮은 농도에서 생성물 피크의 예상 용리점보다 약 5% 낮은 수준까지 용매 세기를 빠르게 증가시켜 생성물만을 표적으로 하는 그래디언트입니다. 펩타이드의 경우, 그래디언트의 완만한 세그먼트는 컬럼 부피당 약 0.25–0.33% 변화에서 가장 효과적입니다. 펩타이드 생성물이 용리된 후, 컬럼은 높은 비율의 유기 용매로 세척된 다음 초기 조건에서 다시 평형화됩니다.

HPLC 지수

Browne, Bennet 및 Solomon이 설명한 바와 같이 TFA:물:아세토니트릴을 완충 시스템으로 사용하여 C₁₈µBondapak 컬럼에서 펩타이드를 용리하는 데 필요한 아세토니트릴의 비율을 예측합니다.

소수성

물에 녹거나 섞이거나 젖지 않는 경향을 말합니다.

이온 교환 크로마토그래피

전하를 띠는 기능기가 표면에 결합된 컬럼을 사용하여 화합물을 분리하는 방법입니다.

이온화

분자가 전자를 얻거나 잃어 전하를 획득하는 과정입니다.

등용매

분리 과정 동안 이동상 조성이 일정하게 유지되는 크로마토그래피입니다.

선형 그래디언트

정해진 시간 동안 이동상 조성을 변화시키는 분리 방법입니다.

로딩

특정 치수의 컬럼에 적용할 수 있는 화합물의 양입니다.

보충 용매

질량에 의한 정제 시스템에서 분취 스트림의 분할된 샘플을 희석하고 검출기로 전달하는 데 사용되는 용매입니다.

질량 용량

질량 로딩; 컬럼 부피에 정비례합니다.

이동상

컬럼에서 화합물을 용리하는 데 사용되는 용매입니다.

이동상 변형제

분리를 개선하기 위한 크로마토그래피 용매에 혼합되는 첨가제입니다.

단일 동위원소 질량

분자 내 각 원소의 가장 높은 동위원소를 사용하여 계산된 질량입니다.

수동 분할기

정의된 분할 비율로 분취 스트림을 연속적으로 샘플링하는 데 사용되는 장치로, 질량에 의한 정제에서 검출기 신호를 관리합니다.

분리능

두 피크 사이의 거리에 상대적인 두 피크의 너비입니다.

역상 크로마토그래피

이동상이 충전재보다 극성이 강한 분리 방법의 일종입니다. 화합물은 무극성 고정상과의 상호작용에 따라 분리됩니다.

스케일링

분리를 유지하면서 작은 컬럼에서 큰 컬럼으로 또는 그 반대로 이동하는 것입니다.

분할된 그래디언트

그래디언트의 완만하고 포커싱된 부분을 전후하여 기울기를 유지함으로써 이러한 분리 부분에 대한 크로마토그래피 프로파일을 보존하는 분리 방법입니다.

완만한 그래디언트

컬럼 부피당 유기 용매 농도의 변화율이 낮은 분리 방법입니다.

곁사슬 보호기

펩타이드 합성 중에 곁사슬이 다른 분자와 반응하는 것을 막기 위해 아미노산 곁사슬에 부착되는 유기 분자입니다.

실라놀

샘플과의 상호작용에 사용할 수 있는 실리카 기질 컬럼 충전재에 포함된 케미스트리 그룹입니다.

크기 배제 크로마토그래피

용액 내 크기에 따른 화합물을 분리하는 방법입니다.

기울기

그래디언트 분리 중 컬럼 부피당 유기 용매 조성의 변화율입니다.

고체상 펩타이드 합성

첫 C 말단 아미노산이 고체 지지체에 연결되는 중합 사슬에 아미노산을 순차적으로 첨가하여 펩타이드를 만드는 과정입니다.

용액상 펩타이드 합성

펩타이드가 유기 합성 반응으로 용액에서 만들어지는 과정입니다. 짧은 펩타이드 세그먼트는 함께 응축되어 긴 펩타이드 서열을 형성할 수 있습니다.

분할 비율

질량에 의한 정제 과정 중에 검출기로 이동하기 전 샘플 스트림에서 지속적으로 ‘제거’되고 희석된 물질의 양입니다.

시스템 부피

드웰부피(dwell volume) 및 지연 부피와 동일합니다.