用過之管柱的峰型變化

如本系列文章所探討，峰型變化是HPLC分析常見的問題。理想的層析峰應對稱並呈高斯形狀[D. R. Stoll, LC-GC N. Am.39 (2021), pp.353-362]。計算USP拖尾因子(T)可以將峰型對稱性量化，如圖1所示。拖尾因子的值等於1表示完全對稱，小於1稱為前傾峰，大於1則稱為拖尾峰。許多方法要求所有層析峰的拖尾因子皆須保持在指定範圍內。拖尾因子若明顯偏離1，可能會降低相鄰沖堤峰的解析度，增加積分難度[D. R. Stoll, LC-GC N. Am.39 (2021), pp.353-362]。

設定在用過的管柱上執行既定方法時，應進行適用性測試，檢查管柱狀況是否良好。這項測試應評估管柱和系統在產生可接受壓力、滯留時間、峰面積、峰寬和層析峰對稱性等各方面的能力。只要有任何一項測試結果明顯不同於之前使用該管柱得到的結果，就表示管柱可能有問題。圖2所示範例採用的是Waters逆相品質管控標準品（P/N：186006363）。此標準品含七種化合物，使用梯度方法進行了分析。起初（圖2A），USP拖尾因子介於0.90~1.27之間，在可接受範圍內。將管柱從系統拆下，過一段時間後再接回，接著執行同樣的測試方法，這次得到的層析圖如圖2B所示。雖然滯留時間、峰面積和柱壓皆與初次執行的結果相似，但七個層析峰的USP拖尾因子全數提高了，範圍介於1.32~1.65之間。

如第一部分所述，有幾個原因會導致層析峰對稱性出現變化，包括HPLC系統、移動相、樣品以及管柱發生問題[J. W. Dolan and L. R. Snyder, Troubleshooting LC Systems, Springer Science+Business Media, New York, 1989, pp.385-420]。如前所述，要進行疑難排解，建議先仔細分析層析圖，從中觀察峰型變化出現是在所有峰抑或部分峰。若層析圖中的所有層析峰皆出現類似的峰型變化，如圖2B所示，可能原因包括管柱中有空隙、樣品基質成分堆積在管柱中，或者管柱與HPLC系統連接不當。之前使用該管柱時並未出現問題，因此，管柱有空隙或樣品基質堆積的可能性不大。最有可能的原因是與HPLC系統連接不當。重置管柱連接後，再次執行適用性測試方法。如圖2C所示，USP拖尾因子已經恢復成初始值。由此可知，問題出在管柱連接不正確，導致管柱與連接系統的管路之間出現空隙（見圖3）。即使是很小的空隙，也足以導致峰型畸變。如需使用各類末端接頭將管柱連接到數個HPLC系統的示範教學，請觀看系列影片，網址：如何將HPLC管柱連接到Waters LC系統