Guide complet pour l’hydrolyse et l’analyse des acides aminés

La station de travail d’hydrolyse et de dérivatisation d’Eldex (Eldex Laboratories, Inc. 30 Executive Court Napa, CA 94558-6278, ou H/D WorkStation, anciennement Pico-Tag) est une unité autonome qui assure une hydrolyse et une dérivatisation précolonne fiables et constantes des échantillons soumis à une analyse des acides aminés. La station de travail offre toutes les fonctions nécessaires à l’hydrolyse des protéines ou des peptides en phase vapeur.

Cette section décrit brièvement comment configurer et utiliser la station de travail. Pour plus d’informations, consultez le manuel de la station de travail d’Eldex.

L’unité doit être raccordée à un système de vide et à une alimentation en azote.

Un vase Dewar et un doigt réfrigérant sont fournis avec la station de travail. Le vase Dewar nécessite de la neige carbonique.

Les blocs de flacons de réaction de l’unité peuvent accueillir jusqu’à 12 tubes d’échantillon simultanément.

• HCl 6 N avec 1 % de phénol en volume
• Azote (qualité prépurifiée)
• Méthanol
• Neige carbonique

1. Nettoyez les tubes d’échantillon avec un acide tel que du HCl 6N. Rincez-les abondamment avec de l’eau, puis avec de l’éthanol à 100 % (non dénaturé). Séchez-les sous vide. À des fins d’identification, les tubes d’échantillon peuvent être marqués avec un crayon à pointe diamant avant d’être placés dans le flacon de réaction.
2. À l’aide d’une seringue ou d’une micropipette, placez une solution contenant 0,5 à 10 µg de l’échantillon dans les tubes à échantillon. Il est possible de placer jusqu’à 12 tubes d’échantillon dans un même flacon de réaction. Les tubes à échantillon doivent être manipulés avec des pinces en Téflon ou des gants en plastique pour éviter toute contamination par contact cutané.
3. Pour permettre au four de s’équilibrer, réglez-le sur 105 °C pendant 20 à 30 minutes avant de procéder à l’hydrolyse.

1. Placez de la neige carbonique dans le vase Dewar autour du doigt réfrigérant. Ajoutez précautionneusement du méthanol ou du 2-propanol dans le piège condenseur.
2. Allumez la pompe à vide.
3. Vissez le bouchon sur le flacon de réaction. Glissez le bouton du capuchon en position ouverte (bouton vert enfoncé).
4. Installez le flacon de réaction sur la station de travail en positionnant le haut du flacon dans l’orifice de vide et en glissant le bas du flacon vers la station de travail sur le sabot noir.
5. Ouvrez la vanne de vide.
6. Une fois que le vacuomètre atteint environ 65 millitorrs, les échantillons sont correctement évaporés.
7. Pour un séchage supplémentaire, laissez le système maintenir cette valeur pendant plusieurs minutes.
8. Fermez la vanne de vide et retirez le flacon de réaction de la station de travail. Dévissez le bouchon du flacon.
9. Ajoutez 200 µL de HCl/phénol au fond du flacon. Veillez à ne pas introduire directement le HCl dans les tubes.
10. Le bouchon du flacon de réaction étant ouvert (bouton vert enfoncé), vissez le bouchon sur le flacon et installez-le sur la station de travail.

1. Vérifiez que la vanne d’azote est fermée et ouvrez délicatement la vanne de vide jusqu’à ce que le vacuomètre indique environ 1–2 torr et que l’HCl commence à former des bulles. La procédure dure environ 20 à 30 secondes.
2. Fermez la vanne de vide.
3. Ouvrez la vanne d’azote et purgez pendant cinq secondes. Fermez la vanne d’azote.
4. Répétez le cycle vide-azote trois fois. Laissez la vanne de vide ouverte après le dernier cycle.
5. Ne laissez pas l’acide s’évaporer jusqu’à siccité. Si le vacuomètre passe en dessous de 500 millitorrs, arrêtez la purge.

1. Lorsque le flacon est sous vide, fermez la vanne du bouchon du flacon (bouton rouge enfoncé).
2. Fermez la vanne de vide et retirez le flacon de la station de travail.
3. Placez le flacon de réaction dans le four. Utilisez des gants ou des pinces pour éviter tout contact avec l’intérieur du four.
4. Vous pouvez à présent désactiver les systèmes de vide et d’azote de la station de travail.

1. Après 20 à 24 heures, retirez le flacon du four pour le laisser refroidir. Ouvrez la vanne du capuchon du flacon (bouton vert enfoncé). Retirez le bouchon du flacon de réaction et retirez délicatement les tubes à échantillon avec une pince revêtue de Téflon. Utilisez des chiffons de laboratoire pour éliminer le HCl de l’extérieur de chaque tube.
2. Transférez les tubes d’échantillon dans un nouveau flacon de réaction.
3. Vissez le bouchon du flacon de réaction sur le flacon.
4. Ouvrez la vanne du capuchon du flacon (bouton vert enfoncé). Installez le flacon de réaction sur la station de travail et ouvrez délicatement la vanne de vide.
5. Une fois que le vacuomètre atteint environ 65 millitorrs, les échantillons sont correctement évaporés.
6. Pour un séchage supplémentaire, laissez le système maintenir cette valeur pendant plusieurs minutes.