Praktische Ansätze zur Peptidtrennung

Aktiver Splitter

Gerät, das den präparativen Fluss nach einem definierten Splitverhältnis splittet, das der Anwender programmiert hat und das Detektorsignal bei der massengeleiteten Aufreinigung steuert. Die Probe wird mit einem Make-up-Lösungsmittel verdünnt und an die Detektoren übertragen.

Verdünnung an der Säule

Patentierte Injektionstechnik, die die Massenkapazität erhöht, die Auflösung verbessert, die Lebensdauer der Säule erhöht und die Robustheit des LC-Systems verbessert, indem die Probe in einem starken Lösungsmittel am Kopf der Säule verdünnt wird.

Durchschnittliche Masse

Masse eines Ions oder Moleküls, gewichtet nach seiner Isotopenzusammensetzung

Zentroid

Kontinuierliche Daten, die so prozessiert werden, dass für jede Ionenverteilung in einem Massenspektrum ein einzelner, zentrierter Datenpunkt angezeigt wird, und die als Linien im Massenspektrum dargestellt werden.

Ladungszustand

Massenspektrometer arbeiten auf der Basis des Masse-Ladungsverhältnisses (m/z), wobei z der Ladungszustand ist. Die Berechnung erfolgt durch Division von 1 Da, dem theoretischen Massenunterschied zwischen den Isotopen, durch den tatsächlichen Massenunterschied zwischen den Isotopen des Moleküls.
Einzelladung m/z = (M+H)/1
Doppelladung m/z = (M+2H)/2
n Ladung m/z = (M+nH)/n
Isotopenpeaks von n-geladenen Ionen sind durch 1/n Da getrennt (z. B. sind Isotopenpeaks von doppelt geladenen Ionen durch 0,5 Da getrennt). Mehrfache Ladungen erweitern den Massenbereich des Massenspektrometers.

Chromophor

Molekülgruppe, die Licht einer bestimmten Frequenz absorbiert.

Säulenvolumen

Volumen im Säulenkörper.

Kontinuumsdaten

Vollständiges Profil der Verteilung aller in einem Massenspektrum vorhandenen Signale.

Spaltung

Die Entfernung des Peptids vom Harz bei der Festphasen-Peptidsynthese.

Verzögerungsvolumen

Das Volumen vom Punkt der Gradientenmischung bis zum Säulenkopf in einem chromatographischen System

Entschützung

Die Entfernung von Schutzgruppen der Aminosäure-Seitenkette. Auch die Entfernung von N-terminalen Peptidschutzgruppen bei der Festphasen-Peptidsynthese.

Dwell-Volumen

Wie beim Systemvolumen

Elektrosprayionisierung

Atmosphärische Ionisierungstechnik, die sehr wenig Fragmentierung erzeugt und für die Analyse polarer Verbindungen und Biomoleküle nützlich ist.

Fokussierter Gradient

Gradienten, die nur auf das Produkt abzielen, indem sie die Lösungsmittelstärke von niedrigen Konzentrationen, die für die Probenbeladung verwendet werden, auf etwa 5 % unterhalb des erwarteten Elutionspunkts für den Produktpeak erhöhen. Bei Peptiden wird das flache Segment des Gradienten am besten mit einer Änderung von etwa 0,25 – 0,33 % pro Säulenvolumen gemessen. Sobald das Peptidprodukt eluiert ist, wird die Säule mit einem hohen Prozentsatz an organischem Lösungsmittel gewaschen und dann wieder bei den Anfangsbedingungen äquilibriert.

HPLC-Index

Prognostiziert den Prozentsatz an Acetonitril, das erforderlich ist, um das Peptid von einer C₁₈ µBondapak-Säule mit TFA:Wasser:Acetonitril als Puffersystem zu eluieren, wie von Browne, Bennet und Solomon beschrieben.

Hydrophob

Neigt nicht dazu, sich in Wasser aufzulösen, sich damit zu vermischen oder von Wasser benetzt zu werden.

Ionenaustauschchromatographie

Trennung von Verbindungen mithilfe von Säulen, an deren Oberfläche geladene Funktionen gebunden sind.

Ionisierung

Prozess, bei dem ein Molekül durch Aufnahme oder Verlust von Elektronen eine elektrische Ladung erhält.

Isokratisch

Chromatographie, bei der die Zusammensetzung der mobilen Phase über den Verlauf der Trennung konstant bleibt

Linearer Gradient

Trennmethode, die die Zusammensetzung der mobilen Phase über einen definierten Zeitraum ändert.

Beladen

Die Menge der Verbindung, die auf eine Säule mit spezifischen Abmessungen aufgetragen werden kann.

Zusatzlösungsmittel

Lösungsmittel, das zum Verdünnen der aufgespaltenen Probe und zum Transferieren von Proben aus dem Präparationsstrom zu den Detektoren in einem massengeleiteten Aufreinigungssystem verwendet wird.

Massenkapazität

Massenbeladung; direkt proportional zum Säulenvolumen.

Mobile Phase

Lösungsmittel zur Elution von Verbindungen von einer Säule.

Modifikator der mobilen Phase

Den chromatographischen Lösungsmitteln beigemischte Additive zur Verbesserung der Trennung.

Monoisotopische Masse

Die Masse wird anhand der am häufigsten vorkommenden Isotope jedes Elements im Molekül berechnet.

Passiver Splitter

Gerät zur kontinuierlichen Messung des präparativen Flusses mit einem definierten Splitverhältnis, das das Detektorsignal bei der massengeleiteten Aufreinigung steuert.

Auflösung

Die Breite von zwei Peaks in Bezug auf den Abstand zwischen diesen Peaks.

Umkehrphasenchromatographie

Eine Trennmethode, bei der die mobile Phase polarer als das Packungsmaterial ist. Die Verbindungen werden aufgrund ihrer Wechselwirkung mit der unpolaren stationären Phase getrennt.

Skalierung

Aufrechterhaltung einer Trennung beim Transfer von einer kleinen Säule auf eine große Säule oder umgekehrt.

Segmentierter Gradient

Trennmethode, die die Steigung vor und nach einem flachen, fokussierten Teil des Gradienten beibehält, wodurch das Chromatographieprofil für diese Teile der Trennung beibehalten wird.

Flacher Gradient

Trennmethode, bei der die Änderungsrate der Konzentration des organischen Lösungsmittels pro Säulenvolumen niedrig ist.

Schutzgruppe an der Seitenketten

Organische Moleküle, die an die Seitenketten der Aminosäuren gebunden sind, verhindern, dass die Seitenketten während der Peptidsynthese mit anderen Molekülen reagieren.

Silanol

Chemische Gruppe, die sich auf dem Packungsmaterial der Silika-Substratsäule befindet und für die Wechselwirkung mit der Probe zur Verfügung steht.

Größenausschluss-Chromatographie

Trennung von Verbindungen nach ihrer Größe in der Lösung.

Steigung

Die Änderungsrate der organischen Lösungsmittelzusammensetzung pro Säulenvolumen während einer Gradiententrennung.

Festphasen-Peptidsynthese

Verfahren, bei dem ein Peptid durch sequenzielles Hinzufügen von Aminosäuren zu einer wachsenden Kette konstruiert wird, wobei die erste C-terminale Aminosäure an einen festen Träger gebunden ist.

Peptidsynthese in der Lösungsphase

Prozess, bei dem Peptide in Lösung mit organischen synthetischen Reaktionen hergestellt werden. Kurze Peptidsegmente können zusammen kondensiert werden, um lange Peptidsequenzen zu bilden.

Splitverhältnis

Die Menge an Material, die während der massengesteuerten Aufreinigung kontinuierlich aus dem Probenstrom „entfernt“ und verdünnt wird, bevor sie zu den Detektoren übertragen wird.

Systemvolumen

Entspricht dem Dwell-Volumen und dem Verzögerungsvolumen.