Disociación por transferencia de electrones (ETD)
Analizar las modificaciones postraduccionales y la secuenciación jerárquica de biomoléculas
Desarrollada específicamente para maximizar la confianza, la flexibilidad y la facilidad de uso, la actualización de la capacidad de disociación por transferencia de electrones (ETD), para su uso exclusivo con ionización por electrospray, proporciona una plataforma robusta para la secuenciación y el análisis estructural de péptidos y proteínas.
Como complemento a la Disociación inducida por colisión (CID), la ETD ha demostrado ser particularmente útil para la determinación específica de sitios de modificaciones postraduccionales (PTM) lábiles de péptidos y proteínas. La ETD es una técnica de fragmentación impulsada por radicales, que da como resultado la ruptura del enlace N-Cα del péptido para dar lugar a iones producto del péptido c y z● (cf. iones b e y” utilizando CID), lo que permite la localización precisa de los sitios de fosforilación. Los péptidos/proteínas se disocian por transferencia de electrones de un anión químico del donante a cationes cargados positivamente, lo que conduce a un proceso de fragmentación inherentemente similar al de la disociación por captura de electrones (ECD).
Disociación por transferencia de electrones (ETD)
Descripción general
- Alto rendimiento: los datos de alta resolución de masa exacta y la elevada eficacia de reacción generan datos de secuencia de la máxima calidad.
- Flexibilidad: utiliza diversos reactivos de alta eficacia así como separaciones por movilidad iónica (IMS) con ETD para estudios fundamentales avanzados. Adecuado para su uso con fuentes de ionización por electrospray convencionales y nanoFlow.
- Fácil de utilizar y mantener: introducción fácil y estable y rápido relleno del reactivo de ETD al MS por la sencillez de la fuente de descarga luminiscente de la ETD.
Funcionamiento de la fuente de ETD
La fuente ESI incorpora una fuente de aniones de reactivo de descarga luminiscente de presión intermedia rápida y eficaz. Durante el experimento de ETD, se generan secuencialmente cationes y aniones. La polaridad de la fuente de iones y la masa fijada del cuadrupolo se cambian para suministrar cationes precursores con carga múltiple, seguidos de aniones de radicales reactivos con carga simple (generalmente de 1,4-dicianobenceno [m/z 128]) en la guía de iones T-Wave de la trampa, donde interactúan para formar iones producto ETD.
Los aniones de reactivo formados en una fuente de descarga luminiscente quedan atrapados en la guía de iones Triwave T-Wave de la trampa del instrumento, donde se someten a una rápida reacción de transferencia de electrones con los iones del analito. Multiplica el fragmento de iones péptidos cargados por ETD para obtener predominantemente iones fragmento c y fragmento z.
La formación y captura de los aniones del reactivo y la formación y reacción de iones de la muestra son procesos separados. Cuando se trabaja en modo ETD, el instrumento alterna entre un modo de descarga luminiscente que rellena eficazmente la guía de iones T-Wave de la trampa con aniones y un modo ESI que ioniza la muestra y la hace reaccionar con los aniones del reactivo ETD.
Durante la adquisición, la guía de iones T-Wave de la trampa se utiliza exclusivamente para ETD, pero la guía de iones T-Wave de transferencia sigue estando disponible para CID. Por tanto es posible adquirir datos de ETD y de CID en el mismo experimento.
Compatibilidad con instrumentos
La actualización de la capacidad de disociación por transferencia de electrones (ETD) está disponible para los siguientes instrumentos:
- (MALDI) SYNAPT G2 MS, (MALDI) SYNAPT G2 HDMS
- (MALDI) SYNAPT G2-S MS, (MALDI) SYNAPT G2-S HDMS
- (MALDI) SYNAPT G2-Si MS, (MALDI) SYNAPT G2-Si HDMS
Hay dos productos de actualización diferentes disponibles para cada tipo de instrumento SYNAPT, excepto para SYNAPT G2-Si Se hace para adaptar aquellos instrumentos que no están "preparados para ETD". Los instrumentos preparados para ETD se pueden identificar por el prefijo de su número de serie. Todos los instrumentos SYNAPT G2-Si están preparados para ETD.
Los primeros instrumentos MALDI de la serie SYNAPT G2 también pueden requerir una placa adaptadora de fuente MALDI compatible con ETD de repuesto.
Equipo e instalación
La actualización del campo de capacidad de disociación por transferencia de electrones (ETD) comprende lo siguiente:
- Fuente de ionización de descarga luminiscente ETD y clavija de descarga.
- Tapa del soporte de la muestra de reactivo, hardware de manipulación de gas y válvulas.
- Montaje de circuito impreso de la fuente de repuesto, fuentes de alimentación de trampa y de transferencia T-Wave, grupo de cables de ETD y software adicional. (Instrumentos iniciales de SYNAPT G2)
- Placa PCB de transferencia de la fuente de repuesto y software adicional (instrumentos iniciales de SYNAPT G2-S)
- Manuales de funcionamiento y productos químicos de análisis.
Un ingeniero de servicio técnico de Waters debe realizar la instalación, la confirmación del funcionamiento e impartir formación sobre el funcionamiento.
Recursos
Documentos
Asistencia
Siguientes pasos
