質譜分析(MS)級RapiZyme胰蛋白酶
快速進行蛋白質分解,不純物少,完整到位
對於生物製藥胜肽圖譜或由下而上的蛋白質組學,蛋白質分解因為耗時長,效能取捨複雜,而面臨重重阻礙。而平衡速度和分解完整度,同時維持高再現性、低干擾以及完整的序列覆蓋率,也是一場不間斷的挑戰。此外,在數據分析過程中,通常會因為五花八門的非胰蛋白酶波峰(漏切、自溶波峰、非特異性裂解和不相符的波峰)導致圖譜看起來很雜亂,生產力難以提高。細碎的非預期波峰多如牛毛,鑑定起來相當費時,延宕了重要工作的進度。
質譜分析(MS)級RapiZyme胰蛋白酶在抗自溶方面效果出奇的好,還能達到高純度,而且活性更強,所以速度和分解清潔度都不打折扣。就算是市面上最先進的胰蛋白酶,也都存在令人相當頭痛的自溶現象,可是RapiZyme胰蛋白酶幾乎能完全消除這個問題,所以能在相對較高的濃度下使用,更快完成分解,無需依賴高溫或犧牲分解的完整性。這樣就能縮短樣品準備時間、加快實驗室運作,最重要的是能夠有把握地快速做出重要決策。
規格
概述
- 使用更高比例的抗自溶性酶:蛋白質(E:P),不必依賴高溫,實現在30分鐘內高效分解
- 基線更清晰,數據分析也更有效率
- 序列覆蓋率高,表徵分析和鑑定更有把握
- 豬序列胰蛋白酶經過化學優化和重組表達,可達到再現性和可預測性
- 採用LC-MS相容的賦形劑進行凍乾,提高穩定性、樣品瓶回收率及回溶後的活性,達到一致的效果
- 穩固又靈活,適用於各種要加強工作流程的方案
建議用途:改善蛋白質分解作用,適用於生物製藥胜肽圖譜或由下而上的蛋白質組學。
RapiZyme運作原理
RapiZyme胰蛋白酶是一種經過化學優化的重組胰蛋白酶。由於不是動物來源,不含污染性的胰凝乳蛋白酶,不需要使用L-(tosylamido-2-phenyl) ethyl chloromethyl ketone (TPCK)抑製劑來處理,因此沒有非特異性分解相關的問題。
快速分解
甲基化廣泛又均勻,導致RapiZyme胰蛋白酶的抗自溶性出奇得好。因此RapiZyme胰蛋白酶能在高比例的E:P(例如1:5)條件下使用,短短30分鐘內就完成分解,無需依賴更高的溫度。以Remicade®為例,RapiZyme胰蛋白酶的自溶波峰不到0.1%,漏切波峰不到1%(以總TIC訊號值的百分比量測)。而業界知名競爭對手的胰蛋白酶在相同條件下的自溶波峰達6–7%,漏切波峰達4–5%。
基線乾淨俐落
圖譜可以看出細微變化,方便做出重要決策。監管機關要求每個波峰都要鑑定。像是不相符的波峰、人造波峰、自溶波峰和漏切波峰,鑑定起來相當費時,不必要的雜訊層出不窮。為了鑑定這些有問題的波峰,還要另外進行科學審查和分析,若是連電腦模擬的胰蛋白酶分解本身也算進去的話,那麼光是非胰蛋白酶波峰或自溶波峰,軟體處理時間就會飆破上限。
而有了RapiZyme胰蛋白酶,就能快速有把握地處理樣品,不必忍受雜訊,也沒有人造波峰,基線乾淨俐落。30分鐘全部完成分解。
再現性和純度 - 胰蛋白酶的組成?
RapiZyme胰蛋白酶是經過均勻甲基化和重組(非動物來源)的胰蛋白酶,不含污染性的胰凝乳蛋白酶。不僅如此,它還採用LC-MS相容的賦形劑進行凍乾,讓回溶變得容易又好預測,並可提高樣品瓶中的回收率。
因此,不管是不同批次還是不同分解之間,它們的再現性都很出色。
靈活好用
RapiZyme胰蛋白酶幾乎無所不能,它的表現能滿足您對任何胰蛋白酶(於溶液中或固定化)的期待甚至超出預期。有了RapiZyme胰蛋白酶,您可以:
- 無需去鹽處理,提高MAM、PTM監測、生物製程和蛋白質組學應用的一致性。RapiZyme胰蛋白酶在適量的鹽酸胍下能保持高活性
- 將鹽酸胍稀釋成0.5–0.7M,並以1:5的酶:蛋白質比例(pH 7.5)在2小時內完成分解
- 若為了不影響分解效率而選擇隔夜分解,則不論是何種應用,都能控制人造波峰的問題
- 在室溫和pH 6.5的條件下,以1:100的酶:蛋白質比例完成隔夜分解
- 將傳統的1:20酶:蛋白質比例的分解時間縮短至1-3小時,多出更多靈活性
- 使用熱穩定的RapiZyme加熱,不必將酶固定化,蛋白質分解更簡單輕鬆
- 在70 °C的條件下,以1:10的酶:蛋白質比例可在1小時內完成分解