Enfoques prácticos para el aislamiento de péptidos

Divisor activo

Dispositivo que se utiliza para gestionar la señal del detector de espectrometría de masas mediante el muestreo de la corriente de flujo preparativa con una proporción de división definida como programada por el usuario. La muestra se diluye y se transfiere a los detectores con un eluyente complementario.

Dilución en columna

Técnica de inyección patentada que aumenta la capacidad de masa, mejora la resolución, aumenta la vida útil de la columna y mejora la robustez del sistema de LC al diluir la muestra en un eluyente fuerte en el cabezal de la columna.

Masa media

 Masa de un ion o molécula ponderada según su composición isotópica.

Centroide

Datos continuos procesados para mostrar un solo punto de datos centrado para cada distribución de iones en un espectro de masas, que se muestran como barras en el espectro de masas.

Estado de carga

Los espectrómetros de masas funcionan sobre la base de la relación masa/carga (m/z), donde z se define como el estado de carga. Se calcula dividiendo 1 Da, la diferencia de masa teórica entre isótopos, por la diferencia de masa real de la molécula entre isótopos.
carga simple m/z = ((M+H)/1
carga doble m/z = (M+2H)/2
carga n m/z = (M+nH)/n
Los picos isotópicos de iones cargados con n están separados por 1/n Da (p. ej., los picos isotópicos de iones doblemente cargados están separados por 0,5 Da). La carga múltiple amplía el intervalo de masas del espectrómetro de masas.

Cromóforo

Grupo molecular que absorbe la luz a una frecuencia determinada.

Volumen de columna

Volumen dentro del cuerpo de la columna.

Datos en continuo

Perfil completo de la distribución de todas las señales presentes en un espectro de masas.

Escisión

La eliminación del péptido de la resina en la síntesis de péptidos en fase sólida.

Volumen de retardo

El volumen desde el punto de mezcla del gradiente hasta el cabezal de la columna en un cromatográfico

Desprotección

La eliminación de grupos protectores de la cadena lateral de aminoácidos. También, la eliminación de grupos protectores de péptidos N-terminales en la síntesis de péptidos en fase sólida.

Volumen muerto

Igual que volumen del sistema.

Electrospray

Técnica de ionización atmosférica que produce muy poca fragmentación y es útil para analizar compuestos polares y biomoléculas.

Gradiente focalizado

Gradientes que se dirigen únicamente al producto aumentando rápidamente la fuerza del eluyente desde las bajas concentraciones utilizadas para la carga de la muestra hasta aproximadamente un 5 % por debajo del punto de elución esperado para el pico del producto. Para los péptidos, el segmento superficial del gradiente se analiza mejor con un cambio de aproximadamente 0,25-0,33 % por volumen de columna. Una vez eluido el producto peptídico, la columna se lava con un alto porcentaje de eluyente orgánico y después se vuelve a equilibrar en las condiciones iniciales.

Índice de HPLC

Predice el porcentaje de acetonitrilo necesario para eluir el péptido de una columna C₁₈ µBondapak utilizando TFA:agua:acetonitrilo como sistema de solución tampón, tal y como describen Browne, Bennet y Solomon.

Hidrófobos

Tiende a no disolverse, mezclarse ni humedecerse con el agua.

Cromatografía de intercambio iónico

Separación de compuestos utilizando columnas con funcionalidad cargada unida a su superficie.

Ionización

Proceso por el cual una molécula obtiene una carga eléctrica mediante la ganancia o la pérdida de electrones.

Isocrática

Cromatografía en la que la composición de la fase móvil permanece constante durante el transcurso de la separación

Gradiente lineal

Método de separación que cambia la composición de la fase móvil a lo largo de un período definido.

Cargando

La cantidad de compuesto que se puede aplicar a una columna de dimensiones específicas.

Eluyente complementario

Eluyente utilizado para diluir y transferir la muestra separada del flujo de preparación a los detectores en un sistema de purificación dirigido por masas.

Capacidad de masa

Carga de masa; directamente proporcional al volumen de la columna.

Fase móvil

Eluyentes utilizados para eluir compuestos de una columna.

Modificador de fase móvil

Aditivos mezclados con los eluyentes cromatográficos para mejorar la separación.

Masa monoisotópica

Masa calculada utilizando los isótopos más abundantes de cada elemento en la molécula.

Divisor pasivo

Dispositivo utilizado para muestrear continuamente el flujo de preparación con una relación de división definida; gestiona la señal del detector en la purificación dirigida por masas.

Resolución

La anchura de dos picos en relación con la distancia entre esos picos.

Cromatografía en fase reversa

Tipo de método de separación en el que la fase móvil es más polar que el material de relleno. Los compuestos se separan en función de su interacción con la fase estacionaria no polar.

Escala

Mantener una separación después de la transferencia de una columna pequeña a una columna grande o viceversa.

Gradiente segmentado

Método de separación que mantiene la pendiente antes y después de una parte superficial y enfocada del gradiente, conservando así el perfil cromatográfico de estas partes de la separación.

Gradiente superficial

Método de separación en el que la velocidad de cambio de la concentración de eluyente orgánico por volumen de columna es baja.

Grupo protector de cadena lateral

Moléculas orgánicas unidas a las cadenas laterales de aminoácidos para evitar que las cadenas laterales reaccionen con otras moléculas durante la síntesis de péptidos.

Silanol

Grupo químico ubicado en el material de relleno de la columna de sustrato de sílice que está disponible para interactuar con la muestra.

Cromatografía de exclusión por tamaño

Separación de compuestos en función de su tamaño en la solución.

Slope (Pendiente)

La velocidad de cambio en la composición de eluyente orgánico por volumen de columna durante una separación por gradiente.

Síntesis de péptidos en fase sólida

Proceso mediante el cual se construye un péptido añadiendo secuencialmente aminoácidos a una cadena en crecimiento con el primer aminoácido C-terminal unido a un soporte sólido.

Síntesis de péptidos en fase de solución

Proceso mediante el cual los péptidos se preparan en la solución con reacciones orgánicas sintéticas. Los segmentos de péptidos cortos se pueden condensar para formar secuencias de péptidos largas.

Proporción de división

La cantidad de material que se “elimina” y se diluye continuamente del flujo de muestra antes de transferirla a los detectores durante la purificación dirigida por masas.

Volumen del sistema

Igual que el volumen muerto y el volumen de retardo.