电子转移解离(ETD)
翻译后修饰分析和自上而下的生物分子测序
电子转移解离(ETD)功能升级专为大幅提升可信度、灵活性和易用性而开发,仅用于电喷雾电离,为肽和蛋白质的测序和结构分析提供了强大的平台。
ETD与碰撞诱导解离(CID)互补,经证实非常适用于以位点特异性方式确定肽和蛋白质中不稳定的翻译后修饰(PTM)位点。ETD属于自由基驱动类碎裂技术,可碎裂肽的N-Cα键,产生c和z●离子形式的肽子离子(而CID产生b和y离子),从而实现磷酸化位点的精准定位。供体试剂阴离子向带正电的阳离子进行电子转移,该过程使肽/蛋白质解离,从而引发在本质上与电子捕获解离(ECD)相似的碎裂过程。
概述
- 高性能 - 高分辨率、精确质量数数据和高反应效率带来高质量的序列数据。
- 高度灵活 - 利用一系列高效试剂和采用ETD的离子淌度分离(IMS)进行先进的基础研究。常规和nanoFlow电喷雾离子源均适用。
- 简单易用,方便维护 - 通过简单的ETD辉光放电源即可方便稳定地将ETD试剂导入MS,并且还可以快速补充。
ETD源操作
ESI源配有一个快速、高效的中压辉光放电试剂阴离子源。在ETD实验期间,阳离子和阴离子按顺序产生。ETD通过改变离子源极性和四极杆的设置质量数,先后将形成的多电荷母离子阳离子和单电荷试剂自由基阴离子(通常由对苯二腈形成 [m/z 128])送进捕集T-Wave离子导入器,这些离子将在此处发生相互作用,从而生成ETD子离子。
辉光放电源中形成的试剂阴离子在仪器的Triwave捕集T-Wave离子导入器中被捕集,并在其中与分析物离子发生快速的电子交换反应。ETD产生的多电荷肽离子碎片主要是c碎片离子和z碎片离子。
试剂阴离子的形成和捕集,以及样品离子的形成和反应是两个独立的过程。在ETD模式下运行时,仪器会在辉光放电模式(可为捕集T-Wave离子导入器有效补充阴离子)与ESI模式(可电离样品并使其与ETD试剂阴离子反应)之间切换。
采集期间,捕集T-Wave离子导入器仅用于ETD,但传输T-Wave离子导入器仍可用于CID。因此,可在同一实验中同时采集ETD和CID数据。
仪器兼容性
电子转移解离(ETD)功能升级可用于以下仪器:
- (MALDI) SYNAPT G2 MS、(MALDI) SYNAPT G2 HDMS
- (MALDI) SYNAPT G2-S MS、(MALDI) SYNAPT G2-S HDMS
- (MALDI) SYNAPT G2-Si MS、(MALDI) SYNAPT G2-Si HDMS
除SYNAPT G2-Si外,沃特世为每个型号的SYNAPT仪器均提供了两种不同的升级产品。这样做是考虑到这些仪器尚未“安装ETD”。已安装ETD的仪器可通过其序列号前缀识别。所有SYNAPT G2-Si仪器均已“安装ETD”。
早期的SYNAPT G2系列MALDI仪器可能还需要一个兼容ETD的MALDI源转接板备件。
设备与安装
电子转移解离(ETD)功能现场升级包括以下各项:
- ETD辉光放电离子源和放电针。
- 试剂样品容器盖、气体处理装置和阀。
- 备用的源电路板组件、捕集和传输T-Wave的电源、ETD配线束和其他软件。(早期的SYNAPT G2仪器)
- 备用的源传输电路板组件和其他软件(早期的SYNAPT G2-S仪器)
- 操作手册和测试试剂。
需要由沃特世现场服务工程师负责安装和性能确认并提供操作培训。