肽分离实用方法

主动分流器

按照用户设定的分流比对制备级流量进行采样，通过这种方式来控制质谱检测器信号的装置。然后由补偿溶剂对采集的样品进行稀释并输送至检测器。

柱头稀释

通过在色谱柱柱头处使用强溶剂稀释样品来提高载样量、改善分离度、延长色谱柱寿命和提升LC系统稳定性的专有进样技术。

平均质量数

 根据同位素组成确定的离子或分子质量数。

质心

经过处理的连续数据，显示质谱图中每种离子分布的单一中心点，并且在质谱图中以棒状图的形式显示。

电荷态

质谱仪基于质荷比(m/z)执行分析，其中z即为电荷态。其计算方法是将同位素间的分子实际质量数差除以1 Da（同位素间的理论质量数差）。
单电荷m/z = (M+H)/1
双电荷m/z = (M+2H)/2
n电荷m/z = (M+nH)/n
n电荷离子的同位素峰之间相差1/n Da（例如双电荷离子的同位素峰间隔为0.5 Da）。多电荷离子扩展了质谱仪的质量数范围。

发色团

可吸收特定频率的光的分子基团。

色谱柱体积

色谱柱柱体内部的体积。

连续采集数据

显示质谱图中所有信号的完整分布曲线。

裂解

固相肽合成过程中将肽从树脂上去除的操作。

延迟体积

色谱系统中，从梯度混合处到色谱柱柱头的体积。

去保护

去除氨基酸侧链保护基团，在固相肽合成过程中也指去除N-端肽保护基团。

延迟体积

同“系统体积”。

电喷雾

一种大气压电离技术，该技术几乎不产生碎片离子，非常适用于分析极性化合物和生物分子。

梯度聚焦

仅针对产物制定的梯度，具体是将上样时的低溶剂强度迅速提高至产物峰预计洗脱浓度以下5%。分离肽时，梯度中平缓区段的理想斜率约为单位柱体积变化0.25%–0.33%。肽产物洗脱后，用高浓度有机溶剂冲洗色谱柱，然后在初始条件下重新建立平衡。

HPLC指数

如Browne、Bennet和Solomon所述，该指数可在使用TFA:水:乙腈作为缓冲液体系从C₁₈ µBondapak色谱柱上洗脱肽时预测所需的乙腈比例。

疏水性

不易溶于水、不易与水混溶或不易被水浸润。

离子交换色谱

利用表面键合带电官能团的色谱柱分离化合物的色谱方法。

电离

使得分子通过得失电子而带电的过程。

等度洗脱

流动相组成在分离过程中保持恒定的色谱分析方法。

线性梯度

流动相组成在定义的一段时间内会发生变化的分离方法。

上样量

可进样至特定规格色谱柱的化合物量。

补偿溶剂

在质谱引导的纯化系统中，用于稀释分流自制备级流量的样品并将其输送至检测器的溶剂。

载量

载样量；与色谱柱体积直接成正比。

流动相

用于从色谱柱上洗脱化合物的溶剂。

流动相改性剂

混入色谱流动相中，用于改善分离效果的添加剂。

单同位素质量数

采用分子中各元素丰度最高的同位素质量数计算得到的质量数。

被动分流器

用于按指定分流比连续对制备级流量进行采样的装置；可控制质谱引导的纯化中的检测器信号。

分离度

两色谱峰的宽度与其之间的距离之比。

反相色谱

所用流动相的极性强于色谱柱填料极性的一类分离方法，该方法基于化合物与非极性固定相之间的相互作用分离化合物。

缩放

在分离效果保持不变的前提下，将方法在不同规格色谱柱之间进行转换的过程。

分段梯度

保持梯度平缓部分（即梯度聚焦部分）前后的梯度斜率不变，从而使上述分离阶段的色谱特征保持不变的分离方法。

平缓梯度

单位色谱柱体积内有机溶剂比例变化速率较慢的分离方法。

侧链保护基团

连接到氨基酸侧链上，用于防止侧链在肽合成过程中与其他分子发生反应的有机分子。

硅醇

硅胶基质色谱柱填料上的一种化学基团，可与样品发生相互作用。

体积排阻色谱

根据化合物在溶液中的大小对其进行分离的色谱技术。

斜率

梯度分离过程中单位色谱柱体积内有机溶剂组成的变化速率。

固相肽合成

将C-端起始氨基酸连接到固定支撑物上，按照序列添加氨基酸以延长肽链，从而构建目标肽的过程。

液相肽合成

在溶液中通过有机合成反应生成肽的过程。短肽段可缩合形成长肽序列。

分流比

在质谱引导的纯化过程中，从样品流中连续“取出”并进行稀释之后送入检测器的样品量。

系统体积

同“死体积”和“延迟体积”。