Système ACQUITY UPLC M-Class avec technologie 2D

Élargissement de l’impact de la 2D complète

La LC 2D complète classique utilise un échange d’ions (IEX) suivi d’une phase inverse (RP). Toute approche IEX utilise des tampons contenant des sels susceptibles de provoquer un bruit de fond d’ionisation et des problèmes d’encrassement s’ils pénètrent dans un spectromètre de masse (MS). Les séparations IEX étant basées uniquement sur la charge du peptide, la dimension IEX entraîne souvent une mauvaise résolution chromatographique, les peptides apparaissant en plusieurs fractions, ce qui complique l’interprétation des données.

L’approche 2D améliorée du système ACQUITY UPLC M-Class avec technologie 2D utilise une RP à pH 10 dans la première dimension, puis une RP à pH 2 dans la seconde dimension, pour des résultats bien supérieurs à ceux des méthodologies IEX classiques.

Identifications sécurisées pour une reproductibilité inégalée

Grâce à la résolution de la LC 2D du système ACQUITY UPLC M-Class avec technologie 2D, votre laboratoire peut voir un nombre accru d’identifications sécurisées, y compris des identifications reproductibles et incrémentielles de protéines basées sur la LC 2D. Il en résulte une amélioration de l’identification, de la quantification et de la couverture de séquences des protéines. 

Haute résolution dans les deux dimensions

L’utilisation de la méthode IEX comme première dimension de séparation entraîne souvent une mauvaise résolution et un relargage de la phase stationnaire entre les fractions. L’utilisation d’un support à résolution élevée dans la première étape fournit à votre laboratoire de meilleures informations lors de la dernière étape. Avec le support en phase inverse à pH 10, suivi d’une séparation à particules inférieures à 2 microns à pH plus faible à l’aide du système ACQUITY UPLC M-Class avec technologie 2D, vous pouvez obtenir des séparations orthogonales utiles qui produisent des données de haute qualité.

Une résolution accrue pour une meilleure identification des protéines

Dans cette séparation, la puissance de la LC 2D complète pour la résolution d’échantillons protéomiques complexes est démontrée par cette digestion tryptique d’E. coli. À l’aide du système ACQUITY UPLC M-Class dans une dimension, 0,5 µg ont été chargés sur colonne pour résoudre et identifier 365 protéines à partir de 2 874 peptides. L’identification de 7 661 et 9 415 peptides à partir des séparations à 5 et 10 étapes, respectivement, a été obtenue en ajoutant 2,5 µg au système LC 2D, ce qui a permis d’obtenir une plus grande couverture protéique avec un niveau de fiabilité élevé des résultats.

Grâce à la LC 2D et au système ACQUITY UPLC M-Class, les laboratoires peuvent identifier deux fois plus de protéines de manière plus sûre, récupérer davantage de peptides et obtenir une couverture protéique supérieure avec des résultats très fiables.