Dissociação de transferência de elétrons (ETD)
Analise modificações pós-traducionais e sequenciamento hierárquico de biomoléculas
Desenvolvida especificamente para maximizar a confiança, a flexibilidade e a facilidade de utilização, a atualização de capacidade para a Dissociação por transferência de elétrons (ETD, Electron Transfer Dissociation), para uso exclusivo com ionização por electrospray, oferece uma plataforma poderosa para o sequenciamento e a análise estrutural de peptídeos e proteínas.
Complementar à Dissociação induzida por colisão (CID, Collision Induced Dissociation), a ETD demonstrou ser particularmente útil para a determinação específica de locais de modificações pós-traducionais (PTMs, Post-Translational Modifications) instáveis de peptídeos e proteínas. A ETD é uma técnica de fragmentação orientada por radicais, resultando na clivagem da ligação N-Cα do peptídeo para fornecer íons produtos de peptídeo c e z● (compare com íons b e y” utilizando CID), permitindo a determinação precisa de locais de fosforilação. Peptídeos/proteínas são dissociados por transferência de elétrons de um ânion químico doador para cátions carregados positivamente, o que leva a um processo de fragmentação inerentemente semelhante à Dissociação por captura de elétrons (ECD, Electron Capture Dissociation).
Dissociação de transferência de elétrons (ETD)
Visão geral
- Alto desempenho - Alta resolução, dados de massa exata e alta eficiência de reação geram dados de sequência da mais alta qualidade.
- Flexibilidade - Utiliza uma variedade de reagentes de alta eficiência e emprega Separações por mobilidade Iônica (IMS, Ion Mobility Separations) com ETD para estudos fundamentais avançados. Adequada para utilização com fontes de íons por electrospray convencionais e NanoFlow.
- Facilidade de utilização e manutenção - Introdução fácil e estável e reabastecimento rápido de reagente de ETD para o MS por meio da simplicidade da fonte de descarga luminescente de ETD.
Operação da fonte de ETD
A fonte de ESI incorpora uma fonte de ânions de reagente de descarga luminescente de pressão intermediária rápida e eficiente. Durante o experimento de ETD, cátions e ânions são gerados sequencialmente. A polaridade da fonte de íons e a massa definida de quadrupolo são trocadas para fornecer cátions precursores com carga múltipla, seguidos por ânions radicais reagentes com carga única (geralmente de 1,4-dicianobenzeno [m/z 128]), para a guia de íons T-Wave de trapping, onde eles interagem para formar íons produtos de ETD.
Os ânions reagentes formados em uma fonte de descarga luminescente são capturados na guia de íons T-Wave de trapping Triwave do equipamento, onde são submetidos a uma rápida reação de transferência de elétrons com os íons do analito. Íons de peptídeos com carga múltipla fragmentam por ETD para fornecer íons de fragmentos c e z predominantemente.
A formação e o trapping dos ânions reagentes e a formação e reação de íons da amostra são processos separados. Ao operar no modo de ETD, o equipamento alterna entre um modo de descarga luminescente que reabastece efetivamente a guia de íons T-Wave de trapping com ânions e um modo de ESI que ioniza a amostra e a reage com os ânions reagentes de ETD.
Durante a aquisição, a guia de íons T-Wave de trapping é utilizada exclusivamente para ETD, mas a guia de íons T-Wave de transferência permanece disponível para CID. Portanto, é possível adquirir dados de ETD e de CID no mesmo experimento.
Compatibilidade com equipamentos
A atualização de capacidade para a Dissociação por transferência de elétrons (ETD, Electron Transfer Dissociation) está disponível para os seguintes equipamentos:
- (MALDI) SYNAPT G2 MS, (MALDI) SYNAPT G2 HDMS
- (MALDI) SYNAPT G2-S MS, (MALDI) SYNAPT G2-S HDMS
- (MALDI) SYNAPT G2-Si MS, (MALDI) SYNAPT G2-Si HDMS
Dois produtos de atualização diferentes estão disponíveis para cada tipo de equipamento SYNAPT, exceto para o SYNAPT G2-Si. Isso serve para acomodar os equipamentos que não estão "prontos para ETD". Os equipamentos prontos para ETD podem ser identificados pelo prefixo do número de série. Todos os equipamentos SYNAPT G2-Si estão "prontos para ETD".
Os primeiros equipamentos de MALDI da série SYNAPT G2 também podem exigir uma placa adaptadora de fonte de MALDI compatível com ETD de substituição.
Equipamento e instalação
A atualização de campo de capacidade para a Dissociação por transferência de elétrons (ETD, Electron Transfer Dissociation) compreende o seguinte:
- Fonte de íons de descarga luminescente de ETD e pino de descarga.
- Tampa do suporte de amostras de reagente, hardware de manuseio de gás e válvulas.
- Unidade de PCB da fonte de substituição, fontes de alimentação T-Wave de trapping e transferência, arnês de fiação de ETD e software adicional. (Primeiros equipamentos SYNAPT G2)
- Unidade de PCB de transferência da fonte de substituição e software adicional (primeiros equipamentos SYNAPT G2-S)
- Manuais de operação e substâncias químicas de teste.
É necessário que um engenheiro de serviço de campo da Waters realize a instalação, a confirmação de desempenho e o treinamento de operação.
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