Étalons d’oligonucléotides et d’acides nucléiques

Analogues spécifiques aux oligonucléotides

Les méthodes d’analyse LC peuvent devenir de puissants outils pour caractériser et confirmer la qualité des produits thérapeutiques géniques, qu’il s’agisse d’oligonucléotides synthétiques, d’ARNm ou de transgènes vectorisés. Pour qu’une méthode soit correctement mise en œuvre, il faut la mettre au point, la qualifier et vérifier l’aptitude du système. Disposer de matériaux de référence de qualité qui sont chimiquement similaires à vos analytes peut faire toute la différence.

Notre catalogue varié d’étalons de référence comprend un petit ARN interférent (siRNA), un oligonucléotide antisens conjugué à des lipides (C16-ASO), un ADNsb 20 mères, des échelles de longueur d’ADNsb, ainsi qu’un ARN simple guide (ARNsg). Ces étalons spécifiques aux applications constituent des références prêtes à l’emploi destinées à la mise au point d’une méthode, à la fragmentation MS/MS et intacte, ainsi qu’au test d’aptitude du système.

Gravir l’échelle chromatographique

Pour les analyses IPRP, HILIC et AEX, associez votre séparation à des échelles ADNsb de 15 à 35 mères, de 20 à 60 mères et de 20 à 100 mères. Vérifiez les performances de vos méthodes en matière de pureté, de variants de taille, de modifications nucléotidiques sur les séquences défaillantes (N/N-1) et de variants de squelette. Vérifiez que vos pompes délivrent des gradients exacts, vérifiez la sélectivité de votre colonne de chromatographie d’adsorption et étalonnez la capacité de résolution par exclusion stérique de votre séparation.

Élargissez la chromatographie SEC, AEX et RP aux acides nucléiques de grande taille

Les produits thérapeutiques à base d’acides nucléiques sont de plus en plus volumineux. Alors que les méthodes LC s’améliorent pour des acides nucléiques encore plus grands, il est nécessaire de disposer de nouveaux étalons de compétence et d’aptitude du système. L’échelle ADNdb de 50 à 1 350 pb est certifiée par chromatographie SEC à larges pores et peut également être facilement testée par échange d’anions (AEX) et par chromatographie en phase inverse non dénaturante. Les 17 composés d’ADN double-brin (ADNdb) peuvent servir de point de référence pour l’étalonnage de la taille, l’aptitude du système et le diagnostic de la méthode.

Vérifiez votre efficacité d’extraction

Pour pouvoir bien discerner les propriétés pharmacocinétiques (profil DMPK) des oligonucléotides antisens (ASO), un scientifique doit établir des procédures d’extraction robustes et efficaces. La conjugaison des ASO à des fractions lipidiques améliore la distribution ciblée dans divers tissus, mais cette fonctionnalité s’avère intrinsèquement difficile à récupérer à partir de matrices biologiques en raison de problèmes de solubilité et de niveaux extrêmes de liaison protéique. L’étalon LC/MS d’ASO conjugué aux lipides de Waters est conjugué à une fraction C16 en 5’. Il comprend des modifications 2’-MOE et un squelette phosphorothioate. Il s’agit d’un matériau de référence très discriminant et pouvant servir à évaluer le rendement d’oligonucléotides thérapeutiques synthétiques afin de mieux garantir la mise au point de procédures de préparation d’échantillons quantitatives, telles que les protocoles fournis avec les kits OligoWorks SPE.

Confirmez des analyses non dénaturantes de duplex siRNA

L’analyse de siRNA dans des conditions dénaturantes et non dénaturantes permet une caractérisation complète des impuretés liées au produit. Les méthodes IP-RP et HILIC peuvent facilement être appliquées dans des conditions dénaturantes et non dénaturantes, ce qui facilite les mesures de pureté et d’identité des petits ARN interférents (siRNA). Au-dessus de 40-50 °C environ, la plupart des duplex siRNA commencent à se dissocier en leurs constituants simple brin sens et antisens individuels. Avec une méthode chromatographique non dénaturante correctement mise au point, il devient possible d’examiner la formation duplex et de quantifier la présence d’impuretés d’ARN simple brin (ARNsb) non hybridé en excès. L’étalon LC/MS de siRNA de Waters peut être directement utilisé pour mettre au point et qualifier ces méthodes.