2D 기술이 적용된 ACQUITY UPLC M-Class 시스템

Comprehensive 2D의 영역 확장

기존의 Comprehensive 2D-LC는 이온 교환(IEX) 후 역상(RP)을 사용합니다. 모든 IEX 방식은 염 함유 완충액을 사용하므로 이온화 배경을 일으키고 질량 분석기(MS)에 들어가면 부착 문제를 일으킬 수 있습니다. IEX 분리는 오로지 펩타이드 전하에만 기초하므로 IEX 차원은 종종 펩타이드가 여러 파편으로 나타나는 빈약한 크로마토그래피 분리능 결과를 야기하여 데이터 해석을 어렵게 만듭니다.

2D 기술이 적용된 ACQUITY UPLC M-Class 시스템의 개선된 2D 방식은 첫 번째 차원에서 pH 10, RP를 사용하고 두 번째 차원에서는 pH 2, RP를 사용하여 기존 IEX 분석법을 훨씬 능가하는 결과를 얻어냅니다.

확실한 식별로 높은 재현성 실현

2D 기술이 적용된 ACQUITY UPLC M-Class 시스템의 2D-LC 분리능을 통해 이제 실험실에서는 2D-LC를 기반으로 하는 단백질의 재현성 및 증분 식별을 포함하여 확실한 식별의 수를 늘릴 수 있습니다. 그러면 단백질 식별과 정량화, 시퀀스 범위가 향상됩니다. 

두 차원 모두에서 높은 분리능 실현

IEX를 첫 번째 분리 차원으로 사용하면 분리능이 떨어지고 분취가 서로 혼입되는 경우가 많습니다. 첫 단계에서 이 문제를 해결하는 지원책을 이용하면 마지막 단계에서 더 나은 정보가 도출됩니다. 2D 기술이 적용된 ACQUITY UPLC M-Class 시스템을 이용해 pH 10에서 역상 지원 후 더 낮은 pH에서 sub 2μm 분리하면 유용한 직교 분리를 통해 고품질 데이터를 얻을 수 있습니다.

분리능 증가는 단백질 식별 개선으로 연결

이 분리에서 복잡한 단백질체학 샘플의 분리능에 미치는 Comprehensive 2D-LC의 힘은 대장균의 트립신 분해를 통해 잘 드러납니다. 한 차원에서 ACQUITY UPLC M-Class 시스템을 사용하면 컬럼에서 0.5µg가 로드되어 2874개 펩타이드에서 365개 단백질이 분해 및 식별됩니다. 2D-LC 시스템에 2.5µg을 추가함으로써 5단계 분리 및 10단계 분리에서 각각 7661개와 9415개 펩타이드를 식별했습니다. 그 결과 단백질 범위가 넓어지고 결과의 신뢰도 또한 커집니다.

2D-LC와 ACQUITY UPLC M-Class 시스템을 이용하면 두 배 많은 단백질을 더 확실하게 식별하고 더 많은 펩타이드를 회수하며 결과에 대한 높은 신뢰도로 단백질 범위를 넓힐 수 있습니다.