• 应用纪要

剖析新型冠状病毒病(COVID-19)：使用Atlantis PREMIER BEH C18 AX混合模式色谱柱分析阿比朵尔

剖析新型冠状病毒病(COVID-19)：使用Atlantis PREMIER BEH C18 AX混合模式色谱柱分析阿比朵尔
  • Bonnie A. Alden
  • Matthew A. Lauber
  • Thomas H. Walter
  • Waters Corporation
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摘要

全球COVID-19疫情导致出现了大量着眼于将现有小分子药物改变用途以治疗SARS-CoV-2感染的研究。参与新型冠状病毒研究的人们日益关注原本开发用于治疗和预防流感的抗病毒药物。以商品名Arbidol®销售的阿比朵尔是目前正在COVID-19临床试验中与其他药物联用的抗病毒药物之一1。无论阿比朵尔治疗新型冠状病毒的临床结果如何，沃特世利用该药物（含有两个碱性基团）展示了混合模式色谱法的优势。本研究证明，与常规的反相材料相比，使用混合模式固定相能够使阿比朵尔获得更清晰的峰形。

优势

使用Atlantis PREMIER BEH C18 AX色谱图代替C18色谱柱，能够获得：

  • 明显更清晰、更对称的阿比朵尔色谱峰
  • 阿比朵尔更快流出

简介

混合模式色谱(MMC)技术可成功用于创建以多种保留机制进行分离的方法。Atlantis PREMIER BEH C18 AX色谱柱包含基于亚乙基桥杂化颗粒的混合模式反相/阴离子交换固定相2。 该固定相不仅含有C18基团，还拥有叔烷基胺基团，在低于约pH 8的条件下形成携带更多正电荷的表面。相对于常规的反相材料，该携带正电荷的表面可增加阴离子（如离子化酸）的保留，减少阳离子（如质子化碱）的保留。对于阿比朵尔等碱性分析物，携带正电荷的表面还可以改善峰形和上样能力，如之前使用表面带电杂化颗粒(CSH)固定相展示的结果一样3。 本应用简报比较了使用Atlantis PREMIER BEH C18 AX色谱柱与常规C18反相色谱柱ACQUITY UPLC HSS T3分析阿比朵尔获得的的峰形和峰宽。

实验

使用以下实验条件分析阿比朵尔。

LC条件

LC系统：

ACQUITY UPLC H-Class Bio

检测器：

ACQUITY UPLC PDA检测器

样品瓶：

聚丙烯塑料，700 µL

色谱柱：

Atlantis PREMIER BEH C18 AX,

1.7 μm, 95 Å, 2.1×50 mm

ACQUITY UPLC HSS T3,

1.8 μm, 100 Å, 2.1×50 mm

柱温：

30 ˚C

样品：

100 µg/mL阿比朵尔，溶于含0.1%甲酸的50%乙腈溶液中

样品温度：

12 ˚C

进样体积：

1 μL

流速：

0.3 mL/min

流动相：

10 mM甲酸铵的

30%乙腈溶液，pH 3.0

结果与讨论

在混合模式色谱中，通过调节流动相的pH和缓冲液浓度，对可离子化分析物的选择性可以在很宽的范围内变化。这是使用MMC开发方法时需要考虑的一项重要手段。在使用pH 3的流动相示例中，Atlantis BEH C18 AX固定相表面带有正电荷。相对于常规的反相材料，该携带正电荷的表面可减少阳离子（例如阿比朵尔的质子化形式）的保留。

图1.阿比朵尔的结构

 https://www.drugbank.ca/drugs/DB13609

在两种色谱柱上使用相同的等度色谱条件，发现由于发生离子排斥，带正电荷的阿比朵尔在Atlantis PREMIER BEH C18 AX色谱柱上的保留性较差。在柱上载样量为0.1 µg时，与使用ACQUITY UPLC HSS T3色谱柱获得的结果相比，利用该混合模式色谱柱还获得了更窄、更对称的峰。在图2所示的色谱图中可以明显看出这些差异。在Atlantis PREMIER BEH C18 AX色谱柱上，阿比朵尔峰宽为6.9 s，而在ACQUITY UPLC HSS T3色谱柱上，峰宽为59 s。

图2.在(A) Atlantis PREMIER BEH C18 AX色谱柱和(B) ACQUITY UPLC HSS T3色谱柱上使用同等色谱条件（10 mM甲酸铵的30%乙腈溶液，pH 3.0）得到的阿比朵尔峰形比较

在该检测条件下，使用ACQUITY UPLC HSS T3色谱柱获得了高保留因子（约39）。为使该保留因子与在Atlantis PREMIER BEH C18 AX色谱柱上观察到的保留因子更接近，将流动相中的乙腈含量提高至40%（同时保持相同的缓冲液强度和pH）。所得色谱图如图3B所示。虽然阿比朵尔的峰宽明显下降，但是仍比Atlantis PREMIER BEH C18 AX色谱柱产生的峰宽高出大约50%。

图3.使用(A) Atlantis PREMIER BEH C18 AX色谱柱和(B) ACQUITY UPLC HSS T3色谱柱在相当的保留因子下得到的阿比朵尔峰形比较

使用Atlantis PREMIER BEH C18 AX色谱柱得到了更窄、更对称的阿比朵尔峰。测得的USP拖尾因子为1.5，而使用ACQUITY UPLC HSS T3色谱柱时，无论采用何种流动相组成，USP拖尾因子均高于2。

结论

混合模式固定相（如Atlantis BEH C18 AX）具有独特的选择性，并且与现有RP固定相互为补充，因此对于在方法开发过程中筛选色谱柱非常有用。除保留离子化酸的能力以外，Atlantis PREMIER BEH C18 AX色谱柱还可以使质子化碱得到清晰、对称的峰，因此在开发多种化合物（无论是极性酸还是疏水性碱，如阿比朵尔）的色谱分离方法时，应将该色谱柱纳入考虑范围内。

参考文献

  1. Liu, C. et al.Research and Development on Therapeutic Agents and Vaccines for COVID-19 and Related Human Coronavirus Diseases.ACS Central Science 2020, 6 (3), 315-331.
  2. Walter, T.H. et al.A New Mixed-Mode Reversed-Phase/Anion-Exchange Stationary Phase Based on Hybrid Particles Waters Application Note 720006742EN
  3. Iraneta, P. C.; Wyndham, K. D.; McCabe, D. R.; Walter, T. H. A Review of Waters Hybrid Particle Technology.Part 3.Charged Surface Hybrid (CSH) Technology and its Use in Liquid Chromatography.Waters White Paper 720003929EN, 2011.

特色产品

720006980ZH，2020年8月

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