Padrões de ácidos nucleicos e oligonucleotídeos

Análogos específicos de oligonucleotídeos

Os métodos analíticos baseados em LC podem se tornar ferramentas poderosas para a caracterização e confirmação da qualidade das terapias genéticas, sejam oligonucleotídeos sintéticos, mRNA ou transgenes com vetores. Um método deve ser desenvolvido, qualificado e depois verificado quanto à adequação do sistema para que seja implementado adequadamente. Ter em mãos materiais de referência de qualidade que sejam quimicamente similares aos seus analitos pode fazer uma grande diferença.

Nosso catálogo variado de padrões de referência inclui RNA de interferência pequena (siRNA, Small Interfering RNA), oligonucleotídeo antissentido conjugado com lipídios (C16-ASO), escadas de ssDNA de 20 mer e de comprimento de ssDNA e RNA guia único (sgRNA, Single Guide RNA). Esses padrões específicos de aplicações fornecem referências prontas para injeção para desenvolvimento de métodos, fragmentação de proteínas intactas e por MS/MS e testes de adequação de sistema.

Subindo a escada cromatográfica

Agrupe sua separação com escadas de ssDNA de 15 a 35 mer, 20 a 60 mer e 20 a 100 mer para análises de IPRP, HILIC e AEX. Verifique o desempenho dos seus ensaios em relação aos quesitos de pureza, variantes de tamanho, sequências de falha (N/N-1), modificações de nucleotídeos e variantes de estrutura. Confirme se suas bombas estão fornecendo gradientes precisos, verifique a seletividade da sua coluna cromatográfica de adsorção e calibre o poder de resolução com base em tamanho da sua separação.

Desbloqueie a SEC, AEX e RP para ácidos nucleicos grandes

As terapias de ácidos nucleicos estão longe de estar diminuindo. À medida que os métodos de LC melhoram para espécies de ácido nucleico ainda maiores, também aumenta a necessidade de novos padrões de proficiência e adequação de sistema. A escada de dsDNA de 50 a 1350 bp é certificada com cromatografia SEC de poro largo e também pode ser prontamente testada por cromatografia de troca aniônica (AEX, Anion-Exchange Chromatography) e cromatografia de fase reversa não desnaturante. Os 17 componentes do DNA de fita dupla (dsDNA, Double Stranded DNA) podem ser utilizados como ponto de referência para calibração de tamanho, adequação de sistema e solução de problemas dos métodos.

Verifique a eficiência da sua extração

Para distinguir bem as propriedades de metabolismo de fármacos e farmacocinética (DMPK, Drug Metabolism and Pharmacokinetic) de oligonucleotídeos antissentido (ASO, Antisense Oligonucleotides), um analista deve estabelecer procedimentos de extração robustos e eficientes. A conjugação de ASO com frações de lipídios melhora a distribuição direcionada para vários tecidos, mas essa funcionalidade tem se mostrado intrinsecamente difícil de recuperar a partir de matrizes biológicas devido a desafios de solubilidade e níveis extremos de ligação com proteínas. O padrão de ASO conjugado com lipídios para LC-MS da Waters é associado a uma fração C16 5' e inclui modificações de 2'-MOE e uma estrutura fosforotioada. Ele é um material de referência altamente discriminatório e pode ser utilizado para avaliar a recuperação de oligonucleotídeos terapêuticos sintéticos para garantir melhor o desenvolvimento de procedimentos quantitativos de preparo de amostras, tais como os protocolos fornecidos com a SPE OligoWorks.

Confirme análises não desnaturantes de siRNA de duplex

A análise de siRNA em condições desnaturantes e não desnaturantes possibilita a caracterização completa de impurezas relacionadas a produtos. Os métodos de IP-RP e HILIC podem ser aplicados facilmente, com condições desnaturantes e não desnaturantes, para ajudar a corroborar medições de pureza e identidade de RNA de interferência pequena (siRNA, Small Interfering RNA). Em temperaturas superiores a aproximadamente 40-50 °C, a maioria dos duplex de siRNA começará a se dissociar em seus constituintes individuais de fita simples com sentido e antissentido. Com um ensaio de LC não desnaturante, desenvolvido adequadamente, é possível investigar a formação de duplex e quantificar a presença de excesso de impurezas de RNA de fita simples (ssRNA, Single Stranded RNA) não hibridizado. O Padrão de siRNA para LC-MS da Waters pode ser prontamente utilizado para desenvolver e qualificar esses ensaios.