用于多肽表征的流动相添加剂

由于吸附、不同的疏水性和特异性等问题，肽和蛋白质的表征可能具有挑战性。

当用液相色谱法（LC）和质谱法（MS）分析多肽时，引入流动相添加剂以促进电离和提高分析物信号是有益的。

此外，这些添加剂（即强酸或缓冲剂）通常用于LC，以改善分析物的保留率和峰形。但是对于质谱分离，高纯度的流动相添加剂是必要的，以减少背景贡献并确保高质量的数据。

最常见的添加剂是用于LC分析的三氟乙酸（TFA）和用于MS分析的甲酸。 除了提高分析物的信号外，流动相添加剂（如TFA）还被用来抑制LC应用中不需要的二级相互作用。然而，还有一种被遗忘的解决方案也要考虑。二氟乙酸（DFA）。

每种可用的选择都为某些技术提供了好处，但添加剂的选择在哪里会对应用产生负面影响？

三氟乙酸 (TFA)

在使用紫外检测的情况下，TFA通常是首选的流动相添加剂，因为它作为一种强酸具有很好的溶解性和分辨力。相反，当使用MS检测时，TFA提供的结果很差，因为去质子化的TFA与感兴趣的肽或分析物形成离子对，减少了送到检测器的分析物丰度。这种现象被称为离子抑制。此外，TFA以污染MS系统而闻名，而且几乎不可能去除。对紫外线检测很好，对质谱检测就不好了。

甲酸 (FA)

甲酸是MS分离中最常用的流动相添加剂。 它在反相LC-MS技术中表现出色，但对紫外检测有一些不公平。例如，即使使用高纯度的FA，紫外基线通常比TFA分离高，而且峰形和对称性会降低。对紫外检测来说不是很好，对质谱检测来说很好。

二氟乙酸 (DFA)

二氟乙酸（DFA）是一种离子配对剂，在基于多肽LC-UV/MS的工作流程中实现了光学峰形和MS响应的平衡。 作为一种比TFA弱的酸，DFA不会抑制离子或污染MS系统。但作为比FA更强的酸，DFA将解析峰并改善紫外检测的对称性。对紫外检测很好，对质谱检测也很好。

总结

当涉及到多肽分析时，流动相添加剂可以显著提高性能。 然而，重要的是要注意你使用的是哪种技术（LC、MS或两者），并根据该技术和应用要求做出适当的选择。

对于只专注于液相色谱分析的科学家来说，TFA可能是你的正确选择。 对于那些只从事质谱分析的人来说，FA可能是您的选择。 对于同时使用两种技术的科学家来说，单一的流动相添加剂，如DFA，可能是您的正确选择。