开发天然产品的分离方法。与Tom Wheat博士举行的网络研讨会上的问答

由于样品基质和分析物化学成分的复杂性，开发天然产品的色谱方法具有挑战性。然而，通过了解你的色谱法的基本参数和有效检测的策略，有很多方法可以克服这些困难。

我最近举办了一次网络研讨会，介绍了用于开发天然产品分离方法的一些技术和工具。 这次会议引发了许多伟大的问题和相当多的讨论。我在此分享这些问题的答案，因为我知道其他人也会从中受益。

1. 判断峰值纯度，以及峰值跟踪是否需要标准？

不，峰值纯度和峰值跟踪的标准是不需要的。如果你确实有标准，你当然会使用它们。 然而，更多的时候，我们使用一个编目程序。在每个色谱实验中，我们记录每个峰的质谱和紫外光谱。然后我们在其他色谱实验中寻找匹配的光谱。通常情况下，我们会观察到一个在之前的实验中没有观察到的光谱的峰值。因此，我们重新审视之前的实验，明确寻找该化合物。 我们正在反复地建立一个样品成分的目录或库。然后，当我们改变分离介质的特性时，我们可以匹配这些光谱特性。 这可以导致每个分析物的保留图，可以用来控制分离的发展。

2. 你是否曾在分离开发系统中加入其他检测器？

当我们在做分离工作，或对完全未知的天然产品样品进行任何形式的分析工作时，我们总是要质疑我们是否遗漏了什么。我们通常会在分离系统中加入正交检测器。我们必须选择多个检测器中的每一个，作为代表不同的物理或化学原理。紫外检测器与质量检测器的组合符合这一标准。在系统中添加第三个检测器是很常见的，最常见的是蒸发光散射检测器。柱子的洗脱液在这三个检测器之间进行分配，这样我们也可以检测没有紫外吸收和没有电离的化合物。

3. 你根据这些原则设计的方法能否用于分离感兴趣的化合物？

是的。然而，我们会选择只使用挥发性的流动相成分来进行分离。 这使得通过简单地蒸发或冻干馏分来回收所收集的材料更加容易。如果我们要结合质谱或蒸发光散射检测，我们还是会选择这些流动相。 如果该方法用于分离，我们通常会尝试获得更完整的分辨率，这样我们可以在不影响纯度的情况下增加样品量。 这也会让我们将该方法扩展到更大的颗粒尺寸，以提高更大样品的经济性。

4. 对于筛选未知物，用50%甲醇、50%乙腈（含甲酸）作为流动相B是否有用？

使用有机溶剂的混合物是一种成熟的做法，有着成功的历史。然而，以系统和可控的方式进行开发实验可能是很难的。我曾使用过一个有一系列实验的协议。首先对样品进行分析，例如，在100%的乙腈中。然后用67%乙腈/33%甲醇、67%甲醇/33%乙腈和100%甲醇进行一系列的运行。从这四个实验中，可以认识到混合溶剂的比例变化对分离的选择性的影响。你可以以系统的方式选择一个最佳分离的中间点。对于这些实验，使用一个多溶剂输送系统是最方便的。四种溶剂可以按需混合，因此不需要手动准备所有不同的流动相。

这些讨论点涵盖了应用于天然产品分离方法的分析原则的广泛范围。成功开发这组检测方法需要关注色谱法的控制和检测模式，以及对结果的解释。 虽然天然产品代表了一类特别具有挑战性的样品，但这里讨论的观点可以应用于广泛的样品类型。

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