方法开发的科学家们请注意!了解复制你现有方法的新工具

网络研讨会亮点 - 简化方法转移。在ACQUITY Arc系统上复制既定方法的新工具

我是Paula Hong博士，沃特世公司的首席科学家。我最近举行了一次网络研讨会，讨论了可能影响既定反相方法在HPLC和UHPLC系统中转移的仪器特性。这些因素包括停留量、柱外分散和流动相预热或温度控制。我们还讨论了评估仪器的方法和一些新的工具，以协助将前几代LC设备上的既定HPLC方法转移到现代UHPLC系统。

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我们有很多很好的问题。以下是我们问答中的一些亮点。

1. 在像UPLC H-Class系统这样的低分散系统上使用HPLC柱（300 x 7.8 mm）时有什么建议吗？

对于一般的低分散系统，高效液相色谱柱可能需要从进样器到柱子以及从柱子到检测器的更大口径的管子，以减少背压并减轻任何强溶剂的影响。具体来说，ACQUITY UPLC H-Class系统可以通过一个30厘米的柱室来容纳更大的色谱柱。这种柱室有多种配置，可采用主动或被动预热。对于高效液相色谱柱和较高的流速，被动预热的配置可能更合适，因为它有较大的空管。这将有助于减少强烈的溶剂效应和降低背压。

2. 当你处于强溶剂中时，你是否建议进行溶剂交换？

是的，-正如前面所讨论的，当观察到强溶剂效应时，一个解决方案是使样品稀释剂与初始流动相条件相匹配。然而，你也可以在进样器和色谱柱之间增加体积以改善混合并减少强溶剂效应。这可以包括增加一段管子或一个柱子过滤器。此外，将你的方法，以及随之而来的进样量，扩展到一个较小的柱子配置，也能减少强溶剂效应。

3. 请您评论一下柱前加热对这些不同的柱/系统变体的分辨率和效率的影响？

溶剂预热对于确保充分的温度控制很重要。温度控制不好会导致热不匹配效应或分离效率的损失。然而，由于在预热器中的停留时间，预热可能会受到流速的影响。许多仪器都有主动和/或被动预热功能。只要流动相温度控制得当，两者都能提供类似的色谱性能。

4. 你提到减少流动池的体积。这是否会降低信号强度？

不，本身不是。事实上，如果减少流动池的体积，而其他一切保持不变，柱外分散会更低。这将导致更小的峰宽和更大的峰高以提高灵敏度。然而，还有其他因素。我们知道，紫外线吸光度是基于比尔定律的，它是由摩尔消光系数、路径长度和浓度得出的。一个低容积的流动池可能也有不同的路径长度。两者都会对吸光度有所贡献。例如，我们发现从10毫米路径的分析型流动池改为8毫米路径的微孔流动池并没有改变灵敏度。虽然低分散的流动池产生了更清晰的峰和更高的分辨率，但较短的路径长度抵消了灵敏度的增加。

5. 我是否应该在我的方法中加入一个 "等价交换"（isocratic hold）？

由于我们永远不知道我们是否要转移到一个具有较大或较小停留量的系统中，因此在我们的方法中增加一个等压保持是有意义的。当我们这样做时，我们可以简单地改变该保持的时间，以调整不同系统的停留量差异。

6. 我是否需要测量我的系统的驻留量？

嗯，这取决于。 大多数制造商在仪器规格中列出了停留的体积值。这给你一个很好的起点。即使你没有一个一般的数值，你也可以测试你的方法，然后根据保留时间对方法进行微小（或重大）的调整。 如果你还在苦苦挣扎，那么测量停留体积可能会帮助你了解你的系统是如何运行的。

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您还可以了解更多关于Waters LC组合和新的 ACQUITY Arc系统 在Waters的网站上。