安进公司、加州大学洛杉矶分校和亚利桑那大学使用BioResolve RP mAb聚苯柱对膜蛋白进行快速LC-MS筛选

作为沃特世公司的一名色谱科学家，我经常有机会到世界各地的不同实验室出差，并与各类研究人员会面。这使我能够及时了解最新的科学趋势和主题，尤其是在快速发展的生物制药分析领域。今年6月，我访问了安进公司在加州千橡市的园区。在那里，我会见了安进公司发现研究组的科学家，他们正在研究开发膜蛋白筛选的平台方法，并正在《分析化学》上发表他们的研究成果。令人惊讶的是，当作者Jennifer Lippens向我们介绍她的研究时，我看到她的平台LC-MS方法中使用的色谱柱是BioResolve™ RP mAb Polyphenyl Column，这是Waters去年发布的色谱柱，也是我广泛参与开发的一项技术。

经许可转载（改编）自Lippens JL, Egea PF, Spahr C, Vaish A, Keener JE, Marty MT, et al. Rapid LC-MS Method for Accurate Molecular Weight Determination of Membrane and Hydrophobic Proteins。Anal Chem 2018. Copyright(2018) American Chemical Society.

这篇题为 "准确测定膜和疏水蛋白分子量的快速LC-MS方法 "的论文可在《分析化学杂志》在线查阅。它讨论了对一种高通量、平台型LC-MS方法的需求，以快速、准确地测定膜蛋白的分子量，这些蛋白被认为参与了癌症等疾病，因此可能被用于治疗。该方法的开发考虑了许多因素，其中一个特别重要的因素是色谱柱的选择。

当我与作者交谈时，她告诉我，他们研究了许多不同的色谱柱（C3、C4、C8和氰基），但对结果不满意，因为这些化学试剂在处理非常疏水性的膜蛋白时表现不佳，因为蛋白质会不可逆地 "粘 "在固定相上。这种情况在探索C8化学成分时尤其普遍，因为对于高通量方法来说，这种键合太有保留力了。然后，在最后一次尝试使用最近推出的新型色谱柱技术--BioResolve RP mAb聚苯基色谱柱时，她发现了一个突破。这种颗粒设计不仅允许使用UPLC压力和更高的产量，而且这种多苯基键合被认为对她的方法很有效，因为它的高覆盖率、结构上的刚性键合将蛋白质吸附的异质性降到最低。此外，这种独特的键合允许使用0.1%甲酸（FA）和0.1%三氟乙酸（TFA）修饰的流动相，更低的温度（65℃），并有机会最大限度地提高色谱分辨率，提高质谱灵敏度，并最大限度地减少携带。

如期刊文章中的图2所示（下图），聚苯柱是唯一能够分离甲酰化和非甲酰化的aquaporinZ膜蛋白的柱子。使用这种柱子，该方法给出了高度可重复的结果。该方法不仅对膜蛋白进行了测试，还测试了一种双特异性抗体构建体。对这种双特异性抗体构建体的评估表明，这种用于筛选膜蛋白的快速LC-MS方法也可用于分析其他疏水性蛋白种类。

经许可转载（改编）自Lippens JL, Egea PF, Spahr C, Vaish A, Keener JE, Marty MT, et al. Rapid LC-MS Method for Accurate Molecular Weight Determination of Membrane and Hydrophobic Proteins。Anal Chem 2018. Copyright(2018) American Chemical Society.

总的来说，看到Waters BioResolve RP mAb聚苯柱通过这种新的膜蛋白LC-MS方法表现出的潜力令人激动。它对更温和的洗脱条件和更高压力的适应性为科学家带来了新的选择。 沃特世目前正在继续努力改善洗脱条件，推出了一种基于纯化的、具有LC-MS质量的二氟乙酸（IonHance DFA）的新流动相添加剂。这种添加剂的作用是优化方法，使其具有FA的增强型MS灵敏度和TFA的高色谱分辨率。有趣的是，如果使用LC-MS质量的DFA，诸如本文所述的方法可以进一步改进。