解决样品丢失之谜

许多年前，我被一家生物制药公司雇用，开发治疗性寡核苷酸的分析方法。当一位新同事警告我关于LC柱上的样品损失时，我以怀疑的眼光看着他。"是的，"他坚持说，"你的部分DNA样品可能不可逆转地结合在柱子上，你将永远看不到它！"我承认，我认为这是个古怪的想法。毕竟，上去的东西，必须下来。注入柱子上的东西必须洗脱。对吗？

错了。

随着我在寡核苷酸方面获得更多的经验，我了解到在新的色谱柱上注射核酸的头几次都会出现明显的样品损失和特有的峰尾现象。这个问题总是要经过几次注射才会消失，实现柱子的 "钝化"。

几年后，我在磷酸肽方面遇到了类似的问题。这一次我的任务是对少量的蛋白质消化物进行LC-MS分析。我很快意识到，单一磷酸化的肽可以很好地从色谱柱中洗脱出来，而双重磷酸化的肽有令人讨厌的尾巴，三重磷酸化的物种在我的基线上洗脱成一个驼峰，我只能通过质谱仪来识别。具有四个或更多磷酸化物种的磷酸肽没有给我带来可识别的峰，而且不可能量化，除非采用一些创造性的技巧（例如，基本的流动相pH值或样品中的EDTA）。我意识到，非特异性的样品吸附在LC硬件上比我预期的要普遍得多。

许多用户从来没有经历过由于LC柱的金属表面造成的样品损失问题。像我一样，他们大多从事中性小分子的分析，这些分子在色谱上表现良好。即使是有经验的分析化学家也往往低估了化合物 "粘附 "在金属氧化物表面的问题。他们甚至可能认为这是个古怪的想法。

好吧，那些分析水杨酸糖、三羧酸有机酸、磷酸肽或基本上任何酸性分析物的人更清楚。我鼓励所有分析科学家关注这个新的博客系列。在这里，我和我的同事将讨论这个常见的分析挑战的解决方案。在LC技术方面有几个技巧和令人兴奋的改进，你可能想了解一下。因此，请继续阅读，它将为您在未来的分析项目中节省时间和麻烦!