一家领先的CRO以客户为中心，带来了质量和生产力的提高

荷兰第一创新公司的Triskelion公司

自1932年以来，荷兰TNO公司和领先的合同研究组织（CRO）Triskelion一直在帮助世界各地的客户开发产品，改善消费者、动物和病人的福祉和健康。面对如此重要的成果，Triskelion通过不断提高其在化学分析、动力学和代谢、免疫学、毒理学和风险评估方面的专业知识来支持其客户。

虽然该公司的三个关键行业--化学、食品和饲料以及制药--所占的业务份额相似，但Triskelion已经在制药和食品领域开发了专门的分析测试。他们的专长包括分析产品，包括小分子和生物制药的ADME、DMPK测试和生物分析的体外和体内服务的完整组合。

为了提供如此多的复杂、关键和时间敏感的服务，Triskelion从一个特意设计的基础设施中运作，与员工技能组合和正确的技术相匹配，所有这些都是为了提高效率、生产力和质量。这其中的核心是他们的客户。

提供独特的服务水平

对于制药行业，项目经理和研究主任Anne Kleinnijenhuis博士说："我们的与众不同之处在于我们有能力设计和开发复杂的生物分析方法¹，支持我们的客户从发现到分析临床前和临床样本。我们的竞争者可能专注于流程的某一部分，但Triskelion拥有内部设施来解决药物开发的整个连续过程。

为了实现这一目标，Triskelion与各种专门选择的技术合作，从分子、基于DNA的技术到分析仪器（GC、LC-MS、IC-MS、ICP-MS），以及这些技术的适当 "混合 "组合。

"我们的客户已经开始依赖这种一站式服务的方法，"Kleinnijenhuis说。"虽然我们的竞争者往往专注于常规分析，但我们在制定复杂的分析策略方面有独特的专长，特别是针对多肽、蛋白质和生物制药，如抗体药物结合物（ADCs）。"

Triskelion的分析专长如此强大，以至于它有信心为制药和食品制造商提供独特的、24/7的应急响应服务。这些客户依靠Triskelion迅速确定事件的来源、原因和潜在后果，如掺假的药品，或生产过程中冷却液的批次污染。该公司在毒理学、风险评估和微生物学方面的广泛专业知识有助于其客户避免灾难性的结果，如由于原料药污染而导致货物被阻止进入中国。Triskelion通过利用广泛的分析技术，包括电子显微镜和LC-MS，提供这些关键服务。

"我们的与众不同之处在于我们有能力设计和开发复杂的生物分析方法，支持我们的客户从发现到分析临床前和临床样本"。
Anne Kleinnijenhuis博士，Triskelion的项目经理和研究主任

招聘和留住最好的劳动力

今天，所有依靠分析化学成功运作的公司都面临着一个巨大的挑战：技术不断改进，变得更加复杂，然而运行这些仪器所需的熟练劳动力却在不断萎缩。

即便如此，Triskelion通过招聘和留住优秀的人才，设法逆势而上。"我们在实验室的各个领域都有经验丰富、才华横溢的化学家、色谱师和质谱师，为我们所服务的每个市场服务，"仪器分析部运营经理理查德-巴斯说。"我们的技术人员都接受过生物分子质谱方面的教育和培训，拥有理学士、硕士和/或博士学位。"

Triskelion也明白，为了留住最优秀的人才，他们必须不断地投资于科学家的技术和仪器培训。

"我们使用Waters LC-MS仪器的一个重要原因是，除了产品的质量，Waters还提供高度的技术培训。这为我们提供了知识和信心，使我们能够解决复杂的研究问题"。

对效率作出真正的承诺

在Triskelion，保持高质量和提高效率不仅仅是公司的目标--它们是所有团队成员的承诺。"当我们接手一个新的项目或研究时，我们会审视流程中的每一个步骤，使其尽可能地高效和经济，"Kleinnijenhuis说。"效率在这里不只是一个流行语"。

我们的优化方法模块在适当的时候被应用于未来的项目，使我们能够向客户提供高质量和高成本效益的项目"。

由于能够分析广泛的分子，Triskelion需要并利用各种技术和分析技术。几年前，他们从HPLC迁移到UPLC。这使他们的科学家能够缩短方法开发时间，大大降低溶剂成本，并优化资产利用。

Triskelion的生物制药客户需要了解其分子在体内的行为，这需要复杂的分析策略。"在设计和开发出基本方法后，我们对流程进行优化，以减少孵化时间，增加动态范围²（更少的超出范围的样品意味着更低的重新分析率），并有效利用夜间时间进行样品运行，"Bas说。"我们试图增加每次运行的样品数量。一个客户要求我们为一个ADC开发和验证（GLP）几种定量混合测定，该ADC含有极度有毒的有效载荷"。

为了使该客户每个系列的样品数量增加三倍，Triskelion购买了一个定制的层流柜，并使用ACQUITY UPLC与Xevo TQ-S质谱仪结合。"我们优化了运行时间，所以较长的系列可以在一夜之间完成，"Bas说。"这使我们能够以有竞争力的价格提供复杂的分析，并将项目的持续时间缩短了一半"。

此外，他们还保持着多样化的质谱仪，每月运行数千个样品。最近，他们购置了具有离子迁移能力的Waters公司的Vion IMS QTof质谱仪。"Vion使我们能够看到并应用新的分离维度，这也改善了我们对大型完整分子的分析，采用不同的技术。

"Kleinnijenhuis说："我们很欣赏HDMSE，因为这种独立于数据的MS-MS功能有助于我们进行代谢物鉴定（Met ID）实验，通过干净的光谱分离和对母离子的片段进行有把握的结构分配，提供精确的选择性和对每个检测到的离子的常规测量。

满足对越来越低的检测水平的需求

随着生物制药市场的不断扩大，客户不断期待从Triskelion在分析大分子方面的长期经验中获益。能让他们达到更低的检测（LOD）和定量（LOQ）水平的技术在这个领域是必不可少的。

为了帮助他们的客户，Triskelion使用传统的串联四极杆质谱，配合微流液相色谱流速从1到100μL/min和内径（I.D.）在0.1到1.0mm之间的色谱柱。其优点是提高了采样效率、色谱分辨率和电离效率，这对于像多肽和蛋白质治疗剂这样的大分子来说尤其重要。

小内径色谱柱的另一个优点是，LC系统需要较低的流体流量来进行色谱分离，这导致了较少的溶剂消耗和较低的注射量要求（图1）。小的样品量要求对有限的样品的研究至关重要。通常情况下，我们在混合测定中装载10μL生物样品。因此，LC-MS成为一种更卑鄙、更精简、更环保的仪器技术。最重要的是，这种按比例缩小的方法比其高流速的同行提供了灵敏度的提高。

Triskelion还使用了Waters的ionKey/MS系统，该系统简化了微流UPLC与质谱的连接，并提供了传统微流LC-MS所没有的重现性和标准化水平。通过修改样品制备和利用微流液相色谱-质谱，与以前开发的UPLC-MS方法相比，他们实现了英夫利西单抗的LOQ明显降低。³在使用ionKey/MS之前，他们尝试了传统的纳流液相色谱，但发现它缺乏定量生物分析应用所需的稳定性。携带的问题，以及相对较长的保留和运行时间限制了它的作用。

采用离子迁移率质谱法是Triskelion公司的一个重要步骤，因为 "我们正在进行相当多的Met ID研究，"Bas说。"较大的分子往往结构非常接近，有很多背景，所以有另一个测量维度，如来自离子迁移率的碰撞截面（CCS）是非常有意义的。我们以前的一些纳米流和高分辨率质谱仪，分析时间太长，而且没有产生足够的跨峰数据点。"

Vion的离子迁移率能力，加上UNIFI科学信息系统，还帮助他们清理了光谱，改善了仅有一个或几个残基差异的类似肽的分离，他们在广泛的胶原蛋白LC-MS分析组合中经常遇到这种情况。

观察和整合未来趋势

有一些趋势和行业变化，Triskelion正在密切关注。

• 随着生物治疗剂变得更加有效和复杂，生物分析继续变得更具挑战性，因此对灵敏度和正交技术的要求也越来越高。
• 提高自动化程度以提高成本和生产力的效率，在行业内不断推动快速上市的过程中是一直存在的。
• 最后，Bas和Kleinnijenhuis都预计客户会对提供更高水平的服务和支持提出更大的要求。

"由于专注于招聘和留住最优秀的人才，整合正确的技术，并为我们的客户做最好的事情，我们有能力满足这些需求，并在未来许多年保持成功和竞争力。

关于Triskelion。让所有人受益的卓越分析

Triskelion将其分析服务推向了新方法和改进方法的前沿。这个专业的卓越中心在帮助制药客户开发安全有效的药物方面发挥着关键作用，从药物发现到临床前和临床开发，为生物利用度和ADME-PK提供支持。他们在方法开发和验证能够进行代谢物鉴定和定量的PK测定方面尤其强大。

该中心还提供食品和饲料的成分分析、QA/QC和安全测试。更重要的是，他们的体外和体内模型使他们能够对食品和食品成分在人体中的功效产生科学的证据。随着Triskelion继续推动自己为客户提供最好的服务，最终结果可能使我们所有人受益。

参考文献

1. Kleinnijenhuis AJ.使用LC-MS对蛋白质进行生物分析的策略。
2. Kleinnijenhuis AJ.探索LC-MS多肽的动态范围。
3. Kleinnijenhuis AJ, Ingola M, Toersche JH, van Holthoon FL, van Dongen WD.使用蛋白A纯化和综合μLC-电喷雾芯片IonKey MS-MS技术对血清中的英夫利西单抗进行自下而上的定量分析（开放访问的pdf）。Bioanalysis 2016; 8, 891-904.
4. 下载本案例研究的PDF文件。