Qu'ont en commun les grandes vacances et la bioanalyse des peptides ?

Ian Edwards

Temps de lecture : 5 minutes
Performance quantique du pramlintide par ACQUITY UPLC I-Class PLUS et Xevo TQ-XS en utilisant QuanRecovery MaxPeak HPS.

Pour commencer, personne ne souhaite des vacances désastreuses, il en va de même pour un essai de bioanalyse ! Qu'est-ce qui fait de bonnes vacances ? Un agent de réservation qui vous comprend, un transport à l'heure, une chambre avec vue à deux pas de la plage, un personnel sympathique et une bonne cuisine ?

Savoir que vous êtes entre de bonnes mains et que vous ne laissez rien au hasard à chaque étape du processus contribue grandement à votre tranquillité d'esprit !

Choisir un agent de voyage de confiance, c'est un peu comme investir dans une solution complète de bioanalyse des peptides et des protéines.

Les bioanalystes évaluent souvent la sensibilité, l'exactitude et la précision des données provenant d'un spectromètre de masse triple quadripolaire haute performance comme un marqueur de la performance du dosage, mais combien de fois l'influence d'une bonne manipulation, préparation et séparation des échantillons est-elle négligée ?

Comme mentionné dans la première partie de cette série de blogs "Où est passé mon échantillon ?"l'ignorance de la liaison non spécifique peut être catastrophique pour la récupération des peptides et des protéines, le pire scénario étant la perte totale de l'échantillon. Qui veut perdre son échantillon avant même de l'injecter ? Dans la deuxième partie de la série "Échantillons perdus dans le conteneur : Liaison non spécifique et impact des agents bloquants", Moon a souligné que les méthodes traditionnelles d'atténuation de la liaison non spécifique (ajout de protéine porteuse, d'agents bloquants et modification des conditions de la solution...) ne constituent généralement pas une approche unique et sont loin d'être idéales.

C'est pourquoi nous avons développé les flacons et les plaques QuanRecovery avec les surfaces à haute performance MaxPeak (HPS), pour qu'ils soient compatibles avec la LC-MS en aval. Les HPS MaxPeak sont des technologies nouvelles et innovantes conçues pour augmenter la récupération des analytes, la sensibilité et la reproductibilité en minimisant les interactions analyte/surface qui peuvent entraîner des pertes d'échantillons.

Figure 1. % de récupération du pramlintide en utilisant QuanRecovery avec MaxPeak (HPS) ou du polypropylène standard.

Dans la note d'application de Caitlin Dunning intitulée "Development of a SPE LC-MS/MS Method Utilizing QuanRecovery Sample Plates with MaxPeak High Performance Surfaces for the Bioanalytical Quantification of Pramlintide from Serum", nous montrons l'impact de l'utilisation d'une plaque standard en polypropylène sur la récupération de l'échantillon pour l'analyse d'un peptide hydrophobe difficile : le pramlintide (Figure 1).

Voilà pour la manipulation des échantillons, mais qu'en est-il de leur préparation ? Le peptide d'intérêt n'arrive pas tout seul. Nous avons souvent besoin d'une méthode de préparation d'échantillon hautement sélective qui peut isoler la cible des autres espèces apparentées dans la matrice de l'échantillon. Mais par où commencer ?

C'est là que la plaque de développement de méthodes PST (Peptide Separation Technology) d'Oasis µElution s'avère utile pour optimiser votre méthode de préparation d'échantillons afin d'obtenir une sélectivité et une récupération maximales. En général, un sorbant d'extraction en phase solide (SPE) à mode mixte, de la famille des sorbants Oasis SPE, est le meilleur moyen de nettoyer et de concentrer l'échantillon (figure 2). Ils utilisent à la fois un mécanisme d'échange d'ions et un mécanisme de rétention en phase inversée, qui fournissent des modes orthogonaux d'isolement et de nettoyage de l'analyte. Brillant !

Figure 2. A. Criblage de plusieurs sorbants SPE (Oasis MAX et WCX) à l'aide de la plaque de développement de méthode µElution PST de Waters pour évaluer rapidement la récupération et les effets de matrice pour le pramlintide. B. Avec un protocole optimisé, la récupération du pramlintide a été portée à 75 %.

La plaque à puits Oasis 96 permet d'éluer les échantillons dans un petit volume, éliminant ainsi le besoin de séchage et de reconstitution, mais comme Kim nous l'a rappelé dans la troisième partie de cette série de blogs, "Sample Prep before LC-MS Quantification of Peptides and Proteins", les échantillons peuvent toujours être perdus pendant le stockage dans le passeur automatique d'échantillons. Maintenant arrivent les plaques de 96 puits QuanRecovery avec MaxPeak HPS!

J'espère donc que vous êtes convaincu de l'importance de la manipulation et de la préparation des échantillons. Qu'en est-il de la séparation par LC ? Votre peptide est-il polaire, hydrophobe ou de grande taille ? En faisant correspondre les propriétés physicochimiques de votre peptide à la bonne colonne de notre gamme de technologies de colonnes de bioanalyse peptidique, vous pouvez obtenir des pics nets et des séparations optimales (figure 3).

Chimie des colonnes pour la séparation des peptides
Figure 3. Chimie des colonnes pour la séparation des peptides.

 

Dans la note d'application de Caitlin, pour obtenir les meilleures performances quantitatives en utilisant la technologie de pointe ACQUITY UPLC I-Class PLUS et Xevo TQ-XS LC-MS, il était important d'utiliser notre solution complète pour obtenir une sensibilité, une exactitude et une précision ultimes :

  • QuanRecovery, plaques d'échantillons compatibles LC-MS avec des surfaces haute performance MaxPeak atténuant la liaison non spécifique
  • Les plaques de développement de méthodes de la technologie de séparation des peptides Oasis µElution ont facilité le criblage rapide des sorbants SPE.
  • La colonne Peptide CSH de l'UPLC ACQUITY a permis d'améliorer la sélectivité, la sensibilité et la largeur des pics.
  • Technologie LC-MS de pointe, ACQUITY UPLC I-Class PLUS et Xevo TQ-XS, pour une sensibilité, une exactitude et une précision ultimes.
Performance quantique du pramlintide par ACQUITY UPLC I-Class PLUS et Xevo TQ-XS en utilisant QuanRecovery MaxPeak HPS.
Figure 4. Performance quantitative des systèmes ACQUITY UPLC I-Class PLUS et Xevo TQ-XS pour le pramlintide à partir de sérum en utilisant QuanRecovery MaxPeak HPS.

Le temps et les ressources sont précieux. L'échantillon l'est aussi, ainsi que la production de résultats de qualité. Pourquoi ne pas atteindre vos limites de détection à cause d'une manipulation et d'une préparation des échantillons déficientes ? Vous ne risqueriez pas vos vacances avec une agence de voyage médiocre, alors pourquoi risquer un lot d'échantillons raté et le non-respect des promesses.

Pourquoi ne pas profiter de la solution complète de Waters pour la bioanalyse des peptides afin d'obtenir les meilleures performances quantitatives LC-MS ? Passer de l'analyse des petites à celle des grandes molécules peut être un défi. Nous avons créé d'excellentes ressources éducatives pour vous permettre d'améliorer vos compétences en matière de bioanalyse des grosses molécules, notamment la carte de référence Oasis pour la bioanalyse des peptides, que vous pouvez télécharger gratuitement, et le Peptide & Protein Bioanalysis Boot Camp, que vous pouvez visionner gratuitement.

Pour plus d'informations, visitez le centre de connaissances DMPK et bioanalyse : waters.com/DMPK ou contactez votre spécialiste local en chimie !

Ressources supplémentaires :

Solutions de bioanalyse des peptides de Waters :