Conseils pour l'entretien de vos systèmes et colonnes HPLC & UHPLC

Récemment, Ade Kujore (Cecil Instruments), Tracie Brombos (GenTech Scientific) et moi-même avons été sollicités par Angelo De Palma, un rédacteur très respecté de la revue Directeur de laboratoire pour contribuer à un article sur la maintenance et l'entretien de vos instruments de laboratoire.

Voici mes conseils et mes meilleures pratiques pour la maintenance des colonnes et des systèmes HPLC, UHLPC et UPLC.

Entretien de vos colonnes LC

Un stockage approprié des colonnes HPLC augmentera leur longévité et leurs performances. Pour un stockage à long terme, il est préférable de suivre les recommandations du fabricant. Waters recommande de stocker les colonnes usagées dans de l'acétonitrile à 100% et d'éviter le stockage à long terme dans des éluants tamponnés. Si la colonne a été utilisée avec une phase mobile tamponnée, il est recommandé de rincer la colonne avec de l'eau de qualité HPLC, puis avec de l'acétonitrile à 100%.

Si le rinçage à l'eau n'est pas effectué, les tampons de la phase mobile risquent de précipiter dans le lit de sorbant et d'endommager la colonne. Fermez complètement la colonne avec les bouchons d'extrémité fournis pour éviter le séchage du lit chromatographique.

Maintenance de vos systèmes HPLC/UHPLC/UPLC

Lorsqu'on travaille avec un système LC, il est très important de le préparer et de le stocker. Lors de la préparation d'un système pour l'application de votre méthode, il est toujours important d'amorcer le système afin de s'assurer que vous disposez de solvants frais dans toutes les lignes requises. Le chimiste doit amorcer toutes les lignes de solvants du système, et pas seulement celles qu'il prévoit d'utiliser. Cela permet non seulement de remplacer le vieux solvant dans toutes les lignes, mais aussi de garantir l'efficacité du dégazeur en répartissant uniformément la pression du vide sur l'ensemble du collecteur. En amorçant toutes les lignes de solvant, l'utilisateur s'assure également que le vieux solvant ne stagne pas dans les lignes de solvant pour développer des algues ou des bactéries qui pourraient affecter la robustesse du système.

De même, les utilisateurs doivent s'assurer que la pompe de lavage des joints est amorcée et fonctionne correctement. Cela permet de nettoyer les joints de la pompe et de les protéger contre les dommages, ce qui permet de maintenir les performances de la pompe.

Les utilisateurs doivent également tenir compte de la phase mobile qu'ils utilisent lorsqu'ils choisissent le solvant à utiliser pour le lavage des joints, ainsi que la fréquence à laquelle il faut laver les joints de la pompe. Les clients qui utilisent des phases mobiles corrosives ou des phases mobiles à forte concentration doivent augmenter la fréquence de la phase mobile pour améliorer la durée de vie des joints de pompe.

Les utilisateurs doivent également amorcer les solvants de lavage de l'aiguille et de purge dans l'échantillonneur automatique. Lors de la sélection d'un solvant pour le lavage de l'aiguille, les utilisateurs doivent utiliser un solvant miscible avec leur échantillon afin de minimiser la quantité de transfert d'une injection à l'autre. Ces solvants doivent être amorcés en même temps que les lignes de phase mobile afin de garantir l'utilisation d'un solvant frais dans tout le système.

Lors de la configuration du détecteur, les utilisateurs doivent s'assurer que l'unité dispose d'un temps de préchauffage adéquat (Waters recommande un minimum de 30 minutes) avant de commencer toute analyse afin de garantir une ligne de base stable pour la quantification. Les utilisateurs doivent régulièrement vérifier et connaître l'énergie de la lampe sur le détecteur, car une chute précipitée de cette énergie peut indiquer des problèmes possibles avec la lampe, la cellule d'écoulement ou l'optique interne du système, et ils doivent appeler l'ingénieur de terrain pour résoudre le problème.

Lorsque le chimiste a fini d'effectuer des analyses, il est important de nettoyer le système en rinçant l'unité avec de l'eau (pour les systèmes utilisant la chromatographie en phase inverse), puis en stockant le système dans un mélange de solvants mobiles organiques et d'eau afin de limiter la croissance bactérienne lorsque le système est inactif.

L'importance des consommables pour passeurs d'échantillons de haute qualité dans les analyses modernes par HPLC et UHPLC.

La sensibilité des instruments d'analyse modernes a progressé et les échantillons sont devenus plus précieux. Les consommables des passeurs d'échantillons doivent suivre le rythme de ces changements. Les clients veulent accéder à la majeure partie de leur précieux échantillon et programment les aiguilles des passeurs d'échantillons pour qu'elles pénètrent profondément dans le flacon afin d'accéder au volume limité de l'échantillon. L'aiguille peut entrer en contact avec le flacon dont les dimensions sont hors tolérance, ce qui peut endommager l'aiguille et entraîner l'arrêt du système. Les flacons doivent être maintenus dans des tolérances dimensionnelles strictes pour éviter d'endommager le système.

La propreté du flacon et du septa est également devenue critique avec la sensibilité croissante des systèmes HPLC et UHPLC. Il y a 10 à 15 ans, les clients ont commencé à voir des contaminants provenant de résidus de flacons et de septa issus du processus de fabrication. Ces résidus étaient toujours présents, mais des pics ont commencé à apparaître au-dessus de la ligne de base à mesure que les systèmes devenaient plus sensibles. Cela oblige les fournisseurs à améliorer les capacités de traitement et de manipulation.

La sensibilité des systèmes ne cessant de s'améliorer, les limites chimiques des matériaux utilisés aujourd'hui dans les consommables des passeurs d'échantillons automatiques sont remises en question. Les fournisseurs devront innover en matière de processus ou de matériaux pour s'assurer que les consommables suivent l'évolution des instruments.

Voir l'article complet de Lab Manager, "Down-proofing Your HPLC & UHPLC Systems".

J'ai écrit un blog sur les détecteurs et aussi une série de blogs sur les pompes binaires et quaternaires pour la chromatographie liquide. Vous êtes les bienvenus pour suivre mon blog!