Additifs de phase mobile pour la caractérisation des peptides

La caractérisation des peptides et des protéines peut s'avérer difficile en raison de problèmes tels que l'adsorption, les hydrophobies variables et la spécificité, pour n'en citer que quelques-uns.

Lors de l'analyse des peptides par chromatographie liquide (CL) et par spectrométrie de masse (SM), il est utile d'introduire des additifs dans la phase mobile afin de faciliter l'ionisation et d'améliorer le signal de l'analyte.

De plus, ces additifs (c'est-à-dire les acides forts ou les tampons) sont couramment utilisés en CL pour améliorer la rétention des analytes et la forme des pics. Mais pour les séparations MS, des additifs de phase mobile de haute pureté sont nécessaires pour réduire la contribution du bruit de fond et garantir la qualité des données.

Les additifs les plus courants sont l'acide trifluoroacétique (TFA) pour l'analyse LC et l'acide formique pour l'analyse MS. Outre l'amélioration du signal de l'analyte, les additifs de phase mobile tels que le TFA sont également utilisés pour inhiber les interactions secondaires indésirables dans les applications LC. Cependant, il existe une autre solution oubliée à prendre en compte : L'acide difluoroacétique (DFA).

Chacune des options disponibles offre des avantages pour certaines techniques, mais où le choix de l'additif peut-il avoir un impact négatif sur l'application ?

Acide trifluoroacétique (TFA)

Le TFA est généralement l'additif de choix pour la phase mobile dans les cas où la détection UV est utilisée en raison de sa grande solubilité et de son pouvoir de résolution en tant qu'acide fort. Au contraire, le TFA donne des résultats médiocres lorsqu'on utilise la détection MS car le TFA déprotoné forme des paires d'ions avec les peptides ou les analytes d'intérêt, ce qui diminue l'abondance de l'analyte délivré au détecteur. Ce phénomène est appelé " suppression d'ions ". En outre, le TFA est connu pour contaminer les systèmes de spectrométrie de masse et pour être pratiquement impossible à éliminer. Il est idéal pour la détection UV, mais pas pour la détection MS.

Acide formique (FA)

L'acide formique est l'additif de phase mobile le plus couramment utilisé dans les séparations MS. Il excelle pour les techniques LC-MS en phase inverse, mais il présente certaines injustices pour la détection UV. Par exemple, même lorsque de l'acide formique de haute pureté est utilisé, les lignes de base UV sont généralement plus élevées que dans les séparations TFA et la forme et la symétrie des pics diminuent. Pas génial pour la détection UV, génial pour la détection MS.

Acide difluoroacétique (DFA)

L'acide difluoroacétique (DFA) est un agent d'appariement des ions qui permet d'atteindre un équilibre entre la forme du pic optique et la réponse MS souhaitée dans les flux de travail basés sur les peptides LC-UV/MS. En tant qu'acide plus faible que le TFA, le DFA ne supprime pas les ions et ne contamine pas le système MS. Mais en tant qu'acide plus fort que le FA, le DFA résoudra les pics et améliorera la symétrie de la détection UV. Excellent pour la détection UV, excellent pour la détection MS.

Conclusion

Lorsqu'il s'agit d'analyse de peptides, les additifs de phase mobile peuvent améliorer considérablement les performances. Cependant, il est important de noter quelle technique (LC, MS, ou les deux) vous utilisez et de faire le choix approprié en fonction de cette technique et des exigences de l'application.

Pour les scientifiques qui se concentrent uniquement sur l'analyse LC, le TFA peut être le bon choix pour vous. Pour ceux qui ne travaillent que sur la MS, le FA peut être le meilleur choix. Pour les scientifiques travaillant sur les deux techniques, un seul additif de phase mobile, tel que le DFA, peut être le bon choix pour vous.