Andrew Aubin (Andy): Directeur, Laboratoire de purification / marketing des systèmes SFx et blogueur
VOC: la voix du chimiste

COV :"J'aiessayé d'adapter ma méthode HPLC analytique à la préparation et cela n'a pas fonctionné."

Andy: C'est l'une des questions les plus courantes que nous entendons de la part des chimistes qui veulent faire de la chromatographie préparative. Nous entendons aussi assez souvent la question suivante :

COV: " J'ai une bonne méthode analytique HPLC, comment puis-je la transposer à la préparation ?"

Andy: Dans ce court blog, je vais fournir certaines des choses de base à faire lorsque vous essayez de mettre à l'échelle une méthode d'analyse à la préparation.

Méthode d'analyse

Tout d'abord, développez la meilleure méthode analytique possible. De meilleures méthodes analytiques impliquent de meilleures méthodes préparatoires. Les phases mobiles doivent être les mêmes à l'échelle analytique et à l'échelle préparatoire, identique A, identique B, et avoir la même concentration d'additifs. Les échantillons doivent être préparés à la même concentration en utilisant le même diluant. Assurez-vous qu'une version préparative de votre colonne analytique est disponible car la chimie de votre colonne doit être la même.

Il est également utile que les deux colonnes aient la même taille de particule et la même longueur. Les études de chargement peuvent être utiles à ce stade pour les utilisateurs afin de confirmer que la résolution adéquate sera maintenue à l'échelle préparative.

Enfin, gardez à l'esprit que les systèmes de préparation n'ont généralement pas la possibilité de chauffer la colonne, il est donc préférable de développer votre méthode d'analyse à température ambiante.

Méthode préparatoire

Pour mettre à l'échelle votre méthode d'analyse, vous devez ajuster votre débit, la pente/le temps du gradient (y compris la compensation du volume du système) et le volume d'injection. Le moyen le plus simple de déterminer ces nouvelles conditions de mise à l'échelle est d'utiliser le calculateur Prep OBD Columns.

Il suffit de saisir vos conditions d'analyse et les dimensions de la colonne de préparation pour que le calculateur génère les conditions de préparation appropriées.

Pour en savoir plus sur la mise à l'échelle de votre méthode, consultez ces deux notes d'application :

• De la HPLC analytique à la HPLC préparative : techniques de mise à l'échelle à l'aide d'un extrait de produit naturel
• Système LC Prep 150 : Considérations sur le passage de l'échelle analytique à l'échelle préparative