Utilisation efficace du détecteur de masse ACQUITY QDa avec votre LC : Questions et réponses avec le Dr. Tom Wheat

J'ai récemment présenté un webinaire décrivant certaines techniques et outils utilisés pour utiliser efficacement le détecteur de masse QDa avec les systèmes de chromatographie liquide. Plusieurs participants ont soumis des questions susceptibles de présenter un intérêt général pour un public plus large.

Il est préférable, comme vous l'avez dit, d'utiliser le mode négatif pour les composés acides (comme l'acide carboxylique), mais ces composés sont souvent mieux élués sur une colonne C18 avec des additifs acides (HCOOH par exemple) ce qui réduit la réponse ? Quelle est la meilleure solution ?

La meilleure solution consiste à utiliser un ajout post-colonne de base pour neutraliser la phase mobile acide. J'utilise généralement de l'hydroxyde d'ammonium et je prépare mon réactif post-colonne à 5 fois la concentration molaire de l'acide dans la phase mobile. Le débit de la pompe de post-colonne est alors de 20% du débit à travers la colonne de sorte que je mélange des quantités équimolaires d'acide et de base dans la source. Pour l'ionisation négative, j'utilise généralement un réactif post-colonne composé de 50 % d'eau et de 50 % d'isopropanol pour renforcer l'ionisation. Nous avons également observé que de nombreux analytes donnent une réponse utilisable en mode négatif même en présence d'acide formique. Cette solution plus simple doit être testée pour déterminer si la sensibilité est adéquate.

Pour les analytes basiques, l'ionisation en mode positif donne la meilleure réponse, et il est courant de préférer une phase mobile acide. Comme indiqué dans la question précédente, cette phase mobile ne donne pas toujours une bonne rétention en phase inversée. Quelle est la meilleure solution ?

Il est souvent utile d'effectuer la séparation chromatographique des bases à un pH élevé pour une rétention accrue. N'oubliez pas que cela nécessite l'utilisation d'un matériau de garnissage hybride, tel que XBridge, CSH ou BEH. La technique d'addition post-colonne décrite ci-dessus peut être utile, en substituant l'acide formique à l'hydroxyde d'ammonium. Nous avons cependant observé que l'ionisation par électrospray est assez efficace pour créer des ions positifs à partir de phases mobiles à pH élevé. Nous nous contentons donc généralement d'appliquer l'ionisation positive à la phase mobile qui convient le mieux à la chromatographie.

Existe-t-il un moyen de savoir si vous avez plusieurs espèces de charges présentes ?

Lorsque vous avez des ions à charge simple, le premier isotope 13C est à 1 unité de masse de la masse mono-isotopique (ion moléculaire). Lorsque les espèces sont doublement chargées, le premier isotope 13C se trouve à 1/2 unité de masse de la masse mono-isotopique. Ce schéma se poursuit pour les états plus chargés, mais l'espacement plus étroit ne sera pas résolu avec le QDa, ou les instruments quadripolaires simples en général. Dans ce cas, cependant, les pics isotopiques ne seront généralement pas détectés, ce qui est une indication en soi de la présence probable d'un ion moléculaire plus fortement chargé.

Je veux augmenter le signal M+H et diminuer les signaux de fragmentation. Comment puis-je y parvenir ?

Le réglage de la tension du cône a la plus grande influence sur la quantité de fragmentation. J'utiliserais un réglage de 15 volts pour ma première injection, puis j'effectuerais une série de passages avec des réglages de tension du cône de plus en plus bas, par pas de 2 volts. Une gamme un peu plus élevée est généralement utilisée pour le mode d'ionisation négative.

Avec le QDa, est-il possible de quantifier 2 composés avec le même temps de rétention ?

Oui, il est absolument possible de quantifier 2 (ou plus) composés avec le même temps de rétention. Avec l'enregistrement d'un seul ion, vous définissez la valeur m/z que vous souhaitez surveiller. Chaque valeur m/z spécifiée apparaîtra comme un chromatogramme qui peut être intégré et calibré indépendamment.

Si vous souhaitez en savoir plus et visionner mon webinaire dans son intégralité, cliquez ici. Pour plus d'informations sur QDa, visitez notre site web.