L'orientation client d'un CRO de premier plan entraîne des améliorations de la qualité et de la productivité

Triskelion, une entreprise de First Dutch Innovations

Depuis 1932, Triskelion, une société du TNO et une organisation de recherche sous contrat (CRO) de premier plan aux Pays-Bas, aide ses clients du monde entier à développer des produits qui améliorent le bien-être et la santé des consommateurs, des animaux et des patients. Avec des résultats aussi importants en jeu, Triskelion soutient ses clients en améliorant constamment son expertise en matière d'analyse chimique, de cinétique et de métabolisme, d'immunologie, de toxicologie et d'évaluation des risques.

Alors que les trois secteurs clés de l'entreprise - chimie, alimentation humaine et animale, et pharmacie - représentent une part similaire de l'activité, Triskelion a développé des tests analytiques spécialisés dans les secteurs pharmaceutique et alimentaire. Leur expertise comprend des offres analytiques qui incluent un portefeuille complet de services in vitro et in vivo pour l'ADME, les tests DMPK et la bioanalyse de petites molécules et de produits biopharmaceutiques.

Afin de fournir autant de services complexes, cruciaux et sensibles au facteur temps, Triskelion opère à partir d'une infrastructure délibérément conçue, associant les compétences des employés et les technologies appropriées, toutes alignées pour accroître l'efficacité, la productivité et la qualité. Les clients sont au centre de tout cela.

Offrir des niveaux de service uniques

Pour le secteur pharmaceutique, le Dr Anne Kleinnijenhuis, chef de projet et directrice d'étude, déclare : "Ce qui nous distingue, c'est notre capacité à concevoir et à développer des méthodes bioanalytiques complexes¹ qui soutiennent nos clients de la découverte à l'analyse d'échantillons précliniques et cliniques. Nos concurrents peuvent se spécialiser dans une partie du processus, mais Triskelion dispose des installations internes pour aborder l'ensemble du continuum du développement des médicaments."

Pour ce faire, Triskelion travaille avec une grande variété de technologies spécifiquement choisies, allant de l'instrumentation moléculaire, basée sur l'ADN, à l'instrumentation analytique (GC, LC-MS, IC-MS, ICP-MS), et des combinaisons "hybrides" de ces technologies, le cas échéant.

"Nos clients en sont venus à dépendre de cette approche de guichet unique", déclare Kleinnijenhuis. "Alors que nos concurrents ont tendance à se concentrer sur les analyses de routine, nous avons une expertise unique dans le développement de stratégies analytiques complexes, notamment pour les peptides, les protéines et les produits biopharmaceutiques tels que les conjugués anticorps-médicaments (ADC)."

L'expertise analytique de Triskelion est si forte qu'elle offre en toute confiance un service unique d'intervention d'urgence 24/7 aux fabricants de produits pharmaceutiques et alimentaires. Ces clients comptent sur Triskelion pour établir rapidement l'origine, la cause et les conséquences potentielles d'un incident, tel qu'un produit pharmaceutique frelaté ou une contamination de lot par le fluide de refroidissement dans le processus de fabrication. La grande expertise de l'entreprise en matière de toxicologie, d'évaluation des risques et de microbiologie aide ses clients à éviter des résultats désastreux, comme le blocage de l'entrée d'une cargaison en Chine en raison de la contamination d'un IPA. Triskelion fournit ces services essentiels en utilisant un large éventail de techniques analytiques, notamment la microscopie électronique et la LC-MS.

" Ce qui nous distingue, c'est notre capacité à concevoir et à développer des méthodes bioanalytiques complexes qui accompagnent nos clients de la découverte à l'analyse d'échantillons précliniques et cliniques. "
Dr Anne Kleinnijenhuis, chef de projet et directrice d'étude chez Triskelion.

Recruter et conserver les meilleurs effectifs

Aujourd'hui, toutes les entreprises qui dépendent de la chimie analytique pour le bon fonctionnement de leurs activités sont confrontées à un énorme défi : la technologie s'améliore constamment et devient plus sophistiquée, mais la main-d'œuvre qualifiée nécessaire pour faire fonctionner ces instruments se réduit.

Malgré cela, Triskelion parvient à contrer cette tendance en recrutant et en conservant de grands talents. "Nous avons des chimistes, des chromatographes et des spectrométristes de masse merveilleusement expérimentés et talentueux dans tous les domaines de notre laboratoire pour chaque marché que nous servons", a déclaré Richard Bas, BSc, directeur opérationnel, analyse instrumentale. "Nos techniciens sont instruits et formés à la spectrométrie de masse biomoléculaire avec des diplômes de BSc, MSc, et/ou PhD."

Triskelion comprend également que pour retenir les meilleurs, elle doit continuellement investir dans la formation technique et instrumentale de ses scientifiques.

"L'une des raisons importantes pour lesquelles nous utilisons les instruments LC-MS de Waters est qu'au-delà de la qualité des produits, Waters assure un haut niveau de formation technique. Cela nous permet d'acquérir les connaissances et la confiance nécessaires pour résoudre nos questions de recherche complexes."

S'engager réellement en faveur de l'efficacité

Maintenir une qualité élevée et accroître l'efficacité sont plus que des objectifs d'entreprise chez Triskelion - ce sont des engagements de tous les membres de l'équipe. "Lorsque nous entreprenons un nouveau projet ou une nouvelle étude, nous examinons chaque étape du processus pour le rendre aussi efficace et économique que possible", a déclaré Kleinnijenhuis. "L'efficacité n'est pas seulement un mot à la mode ici".

Les modules de notre méthode optimisée sont appliqués aux projets futurs, le cas échéant, ce qui nous permet de fournir à nos clients des projets de haute qualité et rentables."

Avec la capacité d'analyser un large éventail de molécules, Triskelion requiert et utilise une variété de technologies et de techniques analytiques. Il y a plusieurs années, l'entreprise est passée de la HPLC à l'UPLC. Cela a permis à leurs scientifiques de raccourcir le temps de développement des méthodes, de réduire considérablement le coût des solvants et d'optimiser l'utilisation des actifs.

Les clients biopharmaceutiques de Triskelion doivent comprendre le comportement de leurs molécules in vivo, ce qui nécessite des stratégies analytiques complexes. "Après avoir conçu et développé une méthode de base, nous optimisons le processus afin de réduire les temps d'incubation, d'augmenter la gamme dynamique² (moins d'échantillons hors gamme signifie des taux de réanalyse plus faibles), et d'utiliser efficacement les heures de nuit pour les séries d'échantillons", a déclaré Bas. "Nous essayons d'augmenter le nombre d'échantillons par cycle. Un client nous a demandé de développer et de valider (BPL) plusieurs essais hybrides quantitatifs pour un ADC, qui contenait une charge utile extrêmement toxique."

Afin de tripler le nombre d'échantillons par série pour ce client, Triskelion a acheté une armoire à flux laminaire personnalisée et a utilisé la technologie ACQUITY UPLC couplée à un spectromètre de masse Xevo TQ-S. " Nous avons optimisé le temps d'exécution pour que les séries les plus longues puissent être réalisées en une nuit ", explique Bas. "Cela nous a permis de proposer des analyses complexes à des prix compétitifs et de réduire de moitié la durée du projet."

En outre, ils entretiennent une diversité de spectromètres de masse, qui traitent des milliers d'échantillons par mois. Plus récemment, ils ont acquis le spectromètre de masse Vion IMS QTof de Waters, doté de capacités de mobilité ionique. "Vion nous permet de voir et d'appliquer une nouvelle dimension de séparation, ce qui améliore également notre analyse des grandes molécules intactes avec une technique différente.

"Nous apprécions HDMSE parce que cette fonction MS-MS indépendante des données nous aide dans les expériences d'identification des métabolites (Met ID) en fournissant une sélectivité précise et une mesure de routine de chaque ion détecté par une séparation spectrale propre et une affectation structurelle sûre du fragment à l'ion parent", a déclaré Kleinnijenhuis.

Répondre à la demande de niveaux de détection de plus en plus bas

Avec l'expansion continue du marché biopharmaceutique, les clients cherchent continuellement à bénéficier de la longue expérience de Triskelion dans l'analyse des grosses molécules. Les technologies qui leur permettent d'atteindre des niveaux de détection (LOD) et de quantification (LOQ) plus bas sont impératives dans cet espace.

Pour aider ses clients, Triskelion utilise le traditionnel MS quadripôle en tandem couplé à un débit LC en microflux allant de 1 à 100 μL/min et à des colonnes dont le diamètre interne (D.I.) est compris entre 0,1 et 1,0 mm. Les avantages sont une augmentation de l'efficacité de l'échantillonnage, de la résolution chromatographique et de l'efficacité de l'ionisation, ce qui est particulièrement pertinent pour les molécules plus grandes comme les thérapies peptidiques et protéiques.

Un autre avantage d'une colonne à faible diamètre interne est que les systèmes LC nécessitent un débit de fluide plus faible pour effectuer une séparation chromatographique, ce qui entraîne une consommation de solvant et un volume d'injection plus faibles (figure 1). Les besoins en petits volumes d'échantillons sont essentiels pour les études avec un échantillon limité. Typiquement, nous chargeons 10 μL d'échantillon biologique dans un essai hybride. Par conséquent, la LC-MS devient une technique instrumentale plus efficace, plus légère et plus écologique. Plus important encore, cette approche à échelle réduite offre des gains de sensibilité par rapport à ses homologues à haut débit.

Triskelion utilise également le système ionKey/MS de Waters, qui simplifie l'association de la CLU à microécoulement avec la spectrométrie de masse et offre un niveau de reproductibilité et de normalisation que l'on ne retrouve pas avec la CL-MS à microécoulement traditionnelle. En modifiant la préparation de l'échantillon et en utilisant la LC-MS en microflux, ils ont obtenu une LOQ significativement plus basse pour l'infliximab par rapport à une méthode UPLC-MS développée précédemment.³ Avant le système ionKey/MS, ils ont essayé la LC traditionnelle en nanoflux mais ont trouvé qu'elle n'avait pas la robustesse requise pour leurs applications bioanalytiques quantitatives. Des problèmes de transfert et des temps de rétention et d'exécution relativement longs ont limité son utilité.

L'adoption de la spectrométrie de masse à mobilité ionique était une étape importante pour Triskelion, car "nous réalisons un grand nombre d'études d'identification des métaux", explique Bas. "Les plus grosses molécules ont tendance à avoir une structure très proche avec beaucoup de bruit de fond, donc avoir une autre dimension de mesure comme la section transversale de collision (CCS) à partir de la mobilité ionique était très intéressant. Avec certains de nos précédents instruments de spectrométrie de masse à nanoflux et à haute résolution, l'analyse prenait trop de temps et ne donnait pas assez de points de données sur le pic."

Les capacités de mobilité ionique de Vion, associées au système d'information scientifique UNIFI, les ont également aidés à nettoyer les spectres et à améliorer la séparation des peptides analogues ne différant que par un ou quelques résidus, ce qu'ils rencontrent souvent dans leur vaste portefeuille d'analyses LC-MS du collagène.

Observer et intégrer les tendances futures

Triskelion suit de près un certain nombre de tendances et de changements dans le secteur.

• La bioanalyse devient de plus en plus difficile à mesure que les biothérapies deviennent plus puissantes et complexes, ce qui entraîne une demande de niveaux de sensibilité et de technologies orthogonales de plus en plus élevés.
• L'automatisation accrue pour améliorer l'efficacité en matière de coûts et de productivité est omniprésente, car l'industrie cherche continuellement à accélérer la mise sur le marché.
• Enfin, M. Bas et M. Kleinnijenhuis s'attendent tous deux à une demande accrue de la part des clients pour offrir des niveaux de service et d'assistance encore plus élevés.

"En mettant l'accent sur le recrutement et la fidélisation des meilleures personnes, l'intégration de la bonne technologie, et en faisant ce qu'il y a de mieux pour nos clients, nous sommes bien placés pour répondre à ces demandes et pour rester prospères et compétitifs pendant de nombreuses années à venir."

À propos de Triskelion : L'excellence analytique au service de tous

Triskelion a poussé ses services analytiques à l'avant-garde des méthodes nouvelles et améliorées. Ce centre d'excellence spécialisé joue un rôle essentiel pour aider les clients de l'industrie pharmaceutique à développer des médicaments sûrs et efficaces en fournissant un soutien pour la biodisponibilité et l'ADME-PK depuis la découverte du médicament jusqu'au développement préclinique et clinique. Il est particulièrement performant dans le développement de méthodes et la validation de tests pharmacocinétiques qui permettent l'identification et la quantification des métabolites.

Le centre propose également le profilage des ingrédients, l'AQ/CQ et les tests de sécurité des denrées alimentaires et des aliments pour animaux. De plus, leurs modèles in vitro et in vivo leur permettent de générer des preuves scientifiques de l'efficacité des aliments et des ingrédients alimentaires chez l'homme. Triskelion continue de s'efforcer de fournir les meilleurs services à ses clients, et le résultat final pourrait bien profiter à chacun d'entre nous.

Références

1. Kleinnijenhuis AJ. Stratégies de bioanalyse des protéines par LC-MS.
2. Kleinnijenhuis AJ. Exploration de la gamme dynamique des peptides par LC-MS.
3. Kleinnijenhuis AJ, Ingola M, Toersche JH, van Holthoon FL, van Dongen WD. Analyse quantitative ascendante de l'infliximab dans le sérum à l'aide de la purification de la protéine A et de la technologie intégrée μLC-electrospray chip IonKey MS-MS (open access pdf). Bioanalysis 2016 ; 8, 891-904.
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