Consejos para mantener sus sistemas y columnas de HPLC y UHPLC

Recientemente, Ade Kujore (Cecil Instruments), Tracie Brombos (GenTech Scientific) y yo fuimos preguntados por Angelo De Palma, un respetado escritor de Director de laboratorio para contribuir a un artículo sobre el mantenimiento y el cuidado de los instrumentos de laboratorio.

Aquí están mis consejos y mejores prácticas para el mantenimiento de columnas y sistemas de HPLC, UHLPC y UPLC.

Mantenimiento de las columnas LC

El almacenamiento adecuado de las columnas de HPLC aumentará la longevidad y el rendimiento. Para el almacenamiento a largo plazo, lo mejor es seguir las recomendaciones del fabricante. Waters recomienda almacenar las columnas usadas en acetonitrilo al 100% y evitar el almacenamiento a largo plazo en eluyentes tamponados. Si la columna se utilizó con fase móvil tamponada, se recomienda lavar la columna con agua de grado HPLC seguida de acetonitrilo al 100%.

Si no se lava con agua, los tampones de la fase móvil pueden precipitar dentro del lecho de sorbente y dañar potencialmente la columna. Selle completamente la columna con los tapones finales suministrados para evitar que se seque el lecho cromatográfico.

Mantenimiento de sus sistemas HPLC/UHPLC/UPLC

Cuando se trabaja con cualquier sistema de LC, es muy importante prepararlo y almacenarlo. Al preparar un sistema para ejecutar su método, siempre es importante cebar el sistema para asegurarse de tener disolventes frescos en todas las líneas necesarias. El químico debe cebar todas las líneas de disolvente del sistema, no sólo las que piensa utilizar. Esto no sólo sustituye el disolvente viejo en todas las líneas, sino que garantiza un rendimiento eficaz del desgasificador al distribuir uniformemente la presión de vacío en todo el colector. Al cebar todas las líneas de disolvente, el usuario también se asegura de que el disolvente viejo no se estanque en las líneas de disolvente para que crezcan algas o bacterias que podrían afectar a la solidez del sistema.

Del mismo modo, los usuarios deben asegurarse de que el lavado de las juntas de la bomba se cebe y funcione correctamente. Esto asegura que los sellos de la bomba se limpien y protejan los sellos de la bomba para que no se dañen, manteniendo así el rendimiento de la bomba.

Los usuarios también deben tener en cuenta la fase móvil que están utilizando cuando seleccionan el disolvente que van a utilizar para el lavado de las juntas, así como la frecuencia con la que deben lavar las juntas de la bomba. En el caso de los clientes que utilicen fases móviles corrosivas o de alta concentración, deberán aumentar la frecuencia de la fase móvil para mejorar la vida útil de las juntas de la bomba.

Los usuarios deben cebar el lavado con aguja y purgar también los disolventes en el automuestreador. Al seleccionar un disolvente para el lavado con aguja, los usuarios deben utilizar un disolvente que sea miscible con su muestra para minimizar la cantidad de arrastre de una inyección a otra. Estos disolventes deben cebarse al mismo tiempo que se ceban las líneas de fase móvil para garantizar que se utiliza disolvente fresco en todo el sistema.

Al configurar el detector, los usuarios deben asegurarse de que el tiempo de calentamiento de la unidad sea el adecuado (Waters recomienda un mínimo de 30 minutos) antes de iniciar cualquier análisis para garantizar una línea de base estable para la cuantificación. Los usuarios deben comprobar y conocer con regularidad la energía de la lámpara del detector, ya que una caída precipitada de dicha energía puede ser un indicio de posibles problemas con la lámpara, la celda de flujo o la óptica interna del sistema, y deben llamar al ingeniero de campo para que solucione el problema.

Cuando el químico termine de realizar los análisis, es importante limpiar el sistema enjuagando la unidad con agua (para los sistemas que funcionan con cromatografía de fase inversa) y luego almacenar el sistema en una mezcla de disolvente móvil de agua orgánica para mitigar el crecimiento bacteriano cuando el sistema esté inactivo.

La importancia de los consumibles del automuestreador de alta calidad en los análisis modernos de HPLC y UHPLC

La sensibilidad de la instrumentación analítica moderna ha avanzado y las muestras son cada vez más valiosas. Los consumibles de los automuestreadores deben seguir el ritmo de estos cambios. Los clientes quieren acceder a la mayor parte de su valiosa muestra y programan las agujas de los automuestreadores para que se adentren en el vial y accedan al limitado volumen de muestra. La aguja podría entrar en contacto con el vial fuera de la tolerancia dimensional, lo que provocaría daños en la aguja y un tiempo de inactividad del sistema. Los viales deben mantenerse con tolerancias dimensionales estrictas para evitar daños en el sistema.

La limpieza del vial y de los septos también se ha convertido en algo crítico con el aumento de la sensibilidad de los sistemas de HPLC y UHPLC. Hace 10-15 años, los clientes comenzaron a ver los contaminantes de los residuos de los viales y septos del proceso de fabricación. Los residuos siempre estuvieron presentes, pero los picos empezaron a aparecer por encima de la línea base a medida que los sistemas se hacían más sensibles. Esto requiere que los proveedores mejoren las capacidades de procesamiento y manipulación.

A medida que la sensibilidad del sistema sigue mejorando, los límites químicos de los materiales que se utilizan hoy en día en los consumibles de los automuestreadores están siendo desafiados. Los proveedores tendrán que innovar los procesos o los materiales para garantizar que los consumibles sigan el ritmo de los avances de los instrumentos.

Vea el artículo completo de Lab Manager, "Down-proofing Your HPLC & UHPLC Systems".

He escrito un blog sobre detectores y también una serie de blogs sobre bombas binarias vs cuaternarias para cromatografía líquida. Le invito a seguir mi blog.