Afrontar el reto de la sensibilidad y la pérdida de muestras

Como recién llegado a la cuantificación de péptidos y proteínas, procedente del mundo de las moléculas pequeñas, he aprendido que tengo que pensar de forma diferente y más creativa para afrontar los retos de estas moléculas. Como científicos con objetivos de sensibilidad en los ensayos, a veces tenemos que tomar medidas adicionales para garantizar no sólo el cumplimiento de este objetivo, sino también la reproducibilidad y la solidez general de los métodos que desarrollamos. Al pensar en este reto, me resulta útil pensar en el flujo de trabajo desde la perspectiva de mi muestra.

En parte 1 de esta serie de blogs, Caitlin Dunning destacó lo fácil que es perder la muestra durante su manipulación y habló de las consecuencias de no hacer nada.

Moon Jung, en parte 2se habló de la unión inespecífica, la principal causa de la pérdida de muestras, y de los pros y los contras del uso de enfoques tradicionales, como los agentes de bloqueo y la proteína portadora, para minimizar la pérdida de muestras.

En esta tercera parte de nuestra serie de blogs, voy a explicar por qué la elección del contenedor de la muestra es tan importante para minimizar la unión inespecífica y asegurarse de que no se pierde la preciada muestra. Es un poco como elegir la habitación de hotel adecuada para sus vacaciones o días festivos.

¿Existe un "hotel de péptidos"? Si existe, ¿cómo puedo elegir el hotel adecuado?

Imagine que ha hecho el trabajo duro y ha preparado su muestra. Está limpia y concentrada: libre de interferencias de la matriz y de contaminantes de la columna o del espectrómetro de masas. Ahora va a estar en un automuestreador LC-MS durante unas horas, o incluso 2 ó 3 días si se planea una gran tirada durante el fin de semana.

¿Debo preocuparme por la pérdida de muestras? ¿Perderé mi péptido por una unión no específica en la placa o el vial de la muestra?

La selección cuidadosa de un contenedor de muestras diseñado para reducir la unión no específica puede ayudar.

¿Dónde puedo encontrar contenedores de muestras que tengan una ventaja de baja unión, pero que también sean óptimos para el automuestreador del sistema LC-MS tanto en formato como en propósito? ¿Existen hoy en día tales contenedores? Lo que quiero decir con esto es que, dado que los volúmenes totales de muestra disponibles disminuyen cada día más, es esencial contar con un vial o una placa diseñados con bajos volúmenes de muestra residuales.

Esto me lleva a mi última pregunta. ¿La concentración de la muestra marca una diferencia en la unión no específica? Como menciona Caitlin Dunning en la Parte 1 "¿A dónde fue mi muestra?" La unión no específica no sólo afecta a nuestra capacidad de alcanzar nuestros objetivos de sensibilidad a concentraciones más bajas. También puede provocar problemas de variabilidad.

Cuando comparamos un contenedor de polipropileno estándar con un contenedor con una superficie de alto rendimiento diseñada para reducir el NSB, vemos una gran diferencia en la sensibilidad para 1 ng/mL de glucagón. Sin embargo, ¡también vemos una diferencia al hacer la comparación de muestras con 100 ng/mL de insulina bovina! La tasa de pérdida puede variar en función del tiempo que la muestra permanezca en el recipiente, lo que da lugar a una variabilidad incluso a concentraciones más altas.

Reto aceptado

Hay que tener muy en cuenta la cuantificación de péptidos y proteínas, especialmente en comparación con el análisis de pequeñas moléculas.

• La selección de contenedores de muestras diseñados para reducir la unión inespecífica y concebidos para los automuestreadores de LC-MS puede garantizar que todo nuestro duro trabajo no se pierda en las últimas horas antes de la recogida de datos.
• Incluso a concentraciones más altas, el recipiente de la muestra puede tener un impacto en la precisión y la repetibilidad.

Afronta este reto con nuestro PPQ Boot Camp y otros recursos.

Campo de entrenamiento en bioanálisis de péptidos y proteínas

Tarjetas de referencia de bioanálisis de péptidos Oasis

Información sobre el producto de extracción de muestras Oasis

Esté atento al próximo blog de la serie "¿Qué tienen en común las grandes vacaciones y el bioanálisis de péptidos?", por Ian Edwards.

Consulte los demás blogs de esta serie:

¿Dónde ha ido mi muestra? Por Caitlin Dunning

Muestras perdidas en el contenedor: La unión no específica y el impacto de los agentes bloqueadores por Moon Chul Jung