Libere el máximo rendimiento de separación de su columna de núcleo sólido

Aspectos destacados del seminario web Comprender el impacto de la dispersión del sistema en el rendimiento de la separación

Hola, soy Jonathan E. Turner, director de marketing de producto de las líneas de columnas ACQUITY® UPLC® y CORTECS® de Waters Corporation. Recientemente dirigí un seminario web en el que hablé de los cambios que hemos visto en los últimos 10 años y de las mejoras sustanciales tanto en las columnas cromatográficas como en la instrumentación que han permitido separaciones más rápidas y eficientes. La columna de configuración de 4,6 x 150 mm, antes común, empaquetada con partículas de 5 µm, ha sido sustituida gradualmente por partículas de núcleo sólido más pequeñas, empaquetadas en columnas de configuración más reducida. Para maximizar el rendimiento de estas partículas de núcleo sólido altamente eficientes, hay que entender el impacto que la dispersión del instrumento tiene en la separación cromatográfica.

Si te lo perdiste, ver el seminario web a la carta.

Tuvimos muchas y muy buenas preguntas. Estos son algunos de los aspectos más destacados de nuestras preguntas y respuestas:

• Según su experiencia, ¿qué es más importante, la dispersión antes o después de la columna?
  En general, para las separaciones isocráticas, ambas tienen un impacto similar en el rendimiento cromatográfico. En particular, para las separaciones en gradiente, la dispersión posterior a la columna tiende a tener un mayor impacto.
• ¿Qué se puede hacer para minimizar la dispersión del sistema en un sistema de HPLC?
  El mayor impacto puede lograrse utilizando segmentos más cortos de tubos de menor diámetro interior antes y después de la columna. La selección de una célula de flujo de bajo volumen adecuada también ayudará.
• ¿Son las celdas de flujo de baja dispersión más propensas a obstruirse?
  No, no lo son con un mantenimiento adecuado de su sistema y buenas prácticas de laboratorio.
• ¿Cuál es la dispersión del sistema ACQUITY Arc UHPLC?
  Dependiendo de la configuración de los instrumentos, 20-30 µL, cuando se mide la anchura de un pico no retenido a 5 sigma.
• ¿Cómo afecta la calidad de los disolventes al rendimiento en HPLC y UPLC?
  El impacto más común de los disolventes de baja calidad es la contaminación de fondo en su detección, especialmente en la EM. Recomendamos disolventes de alta calidad para todas las separaciones de LC.
• ¿Recomiendan el uso de columnas de protección para el sistema UPLC?
  Sí, recomendamos utilizar precolumnas VanGuard para todas las columnas UPLC.
• ¿Cuál es su experiencia con las juntas de bombas e inyectores a una presión superior a 10000 psi?
  En nuestros laboratorios no hemos observado ningún problema. Recomendamos seguir las recomendaciones de los fabricantes sobre el cuidado adecuado y el mantenimiento rutinario.
• What about large volume (100 µl) of water directly on 2.1mm ID 1,8 µm column?
  In general, injecting large volumes of any solvent, will lead to poor chromatographic performance. We recommend injecting volumes of <5% of the total column volume. We would also recommend that the sample diluents not be significantly stronger than the mobile phase.
• ¿Cuál sería el caudal óptimo para una columna de 2,1 x 30 mm y 2,5 µm de tamaño de partícula en un sistema ACQUITY?
  Todo depende de los analitos de interés, la temperatura y la composición de la fase móvil. Un buen rango es de 0,3-0,5 ml/min.
• ¿Cómo afecta el rendimiento de la UPLC con disolventes viscosos como el IPA en comparación con los disolventes habituales como el acetonitrilo?
  Una mayor viscosidad de la fase móvil dará lugar a una mayor presión global del sistema.
• ¿Es la UPLC compatible con la SEC? (cromatografía de exclusión por tamaño)
  Sí, vendemos una línea completa de productos SEC, incluidos los de UPLC.
• En el caso de las muestras filtradas, la adsorción y la pérdida de la muestra pueden ser un problema. Especialmente cuando el volumen de la muestra es pequeño.
  Puede intentar la centrifugación para eliminar las partículas en la inyección. O puede utilizar un filtro de precolumna o una columna de guarda.

Vea este seminario web a la carta.

También puede obtener más información sobre la cartera de LC de Waters, el nuevo sistema ACQUITY Arc y las columnas Cortecs en el sitio web de Waters.

Consulte también nuestro blog sobre la simplificación de la transferencia de métodos: Herramientas novedosas para replicar sus métodos establecidos.