Uso eficaz del detector de masas ACQUITY QDa con su LC: Una pregunta y una respuesta con el Dr. Tom Wheat

Recientemente presenté un seminario web en la que se describen algunas técnicas y herramientas para utilizar eficazmente el detector de masas QDa con sistemas de cromatografía líquida. Varios asistentes presentaron preguntas que pueden ser de interés general para un público más amplio.

Es mejor, como has dicho, utilizar el modo negativo para los compuestos ácidos (como el ácido carboxílico), pero estos compuestos suelen eluirse mejor en una columna C18 con aditivos ácidos (HCOOH, por ejemplo), lo que reduce la respuesta? ¿Cuál es la mejor solución?

La mejor solución es utilizar una adición de base después de la columna para neutralizar la fase móvil ácida. Yo suelo utilizar hidróxido de amonio y hago mi reactivo de poscolumna a 5 veces la concentración molar de ácido en la fase móvil. El caudal de la bomba de poscolumna es entonces el 20% del caudal que pasa por la columna, de modo que estoy mezclando cantidades equimolares de ácido y base en la fuente. Para la ionización negativa, suelo utilizar un reactivo de poscolumna que tiene un 50% de agua y un 50% de isopropanol para mejorar aún más la ionización. También hemos observado que muchos analitos dan una respuesta utilizable en modo negativo incluso en presencia de ácido fórmico. Esta solución más sencilla debería probarse para determinar si la sensibilidad es adecuada.

Para los analitos básicos, la ionización en modo positivo da la mejor respuesta, y es común preferir una fase móvil ácida. Como se indica en la pregunta anterior, esa fase móvil no siempre da una buena retención en fase inversa. ¿Cuál es la mejor solución?

A menudo es útil realizar la separación cromatográfica de las bases a un pH elevado para aumentar la retención. Recuerde que esto requiere el uso de un material de relleno híbrido, como XBridge, CSH o BEH. La técnica de adición posterior a la columna descrita anteriormente puede ser útil, sustituyendo el ácido fórmico por hidróxido de amonio. Sin embargo, hemos observado que la ionización por electrospray es bastante eficiente en la creación de iones positivos a partir de fases móviles de alto pH. Por ello, solemos aplicar la ionización positiva a la fase móvil que mejor se adapte a la cromatografía.

¿Hay alguna forma de saber si hay varias especies de carga presentes?

Cuando se tienen iones de carga simple, el primer isótopo del 13C está a 1 unidad de masa de la masa monoisotópica (ion molecular). Cuando hay especies con doble carga, el primer isótopo de 13C está a 1/2 unidad de masa de la masa monoisotópica. Este patrón continúa con los estados de mayor carga, pero el espacio más estrecho no se resolverá con el QDa, o con los instrumentos de cuadrupolo único en general. En este caso, sin embargo, los picos isotópicos no suelen detectarse, una indicación en sí misma de la probable presencia de un ion molecular más cargado.

Quiero aumentar la señal M+H y disminuir las señales de fragmentación. ¿Cómo puedo hacerlo?

El ajuste del voltaje del cono es el que más influye en la cantidad de fragmentación. Yo utilizaría un ajuste de 15 voltios para mi primera inyección, y luego haría una serie de recorridos con ajustes de voltaje de cono progresivamente más bajos en pasos de 2 voltios. Para el modo de ionización negativa se suele utilizar un rango algo mayor.

Con el QDa, ¿es posible cuantificar 2 compuestos con el mismo tiempo de retención?

Sí, es absolutamente posible cuantificar 2 (o más) compuestos con el mismo tiempo de retención. Con el registro de un solo ion, usted define el valor m/z que desea controlar. Cada valor m/z especificado aparecerá como un cromatograma que puede integrarse y calibrarse independientemente.

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